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文檔簡介
1、目的:白內障是各種原因引起的晶狀體的混濁。白內障一直是公認的首要致盲眼病,我國目前盲人中約有半數(shù)是白內障引起的。白內障是世界范圍內的嚴重公共衛(wèi)生、社會和經(jīng)濟問題,是防盲治盲工作最優(yōu)先考慮的眼病。
導致白內障的因素多種多樣,例如,老化、遺傳、代謝異常、外傷、輻射、中毒和局部營養(yǎng)障礙等。這些因素可引起晶狀體上皮細胞及囊膜損傷,滲透性增加,喪失屏障作用,晶狀體蛋白變性,纖維結構改變,形成混濁。近些年,許多大型流行病學調查均發(fā)現(xiàn)雌
2、激素可保護晶狀體透明性,預防晶狀體混濁,對晶狀體有一定的保護作用。但雌激素抑制白內障發(fā)生的機制尚不十分清楚。實驗研究初步表明雌激素可能通過抗氧化損傷、維持細胞膜正常功能、轉化生長因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)介導、雌激素受體(estrogen receptor,ER)、凋亡等途徑發(fā)揮作用。對雌激素抑制白內障機制的進一步研究將有助于從新的角度揭示白內障形成的深層次機制,為防治白內障提供新的手
3、段,具有重要的社會效益和經(jīng)濟效益。
本實驗把成年去勢雌性Wistar大鼠隨機分組,分別通過點眼或注射的方法給予不同劑量的雌二醇(estradiol,E2),觀察其對晶狀體的透明性,光鏡下的形態(tài)和上皮細胞雌激素受體Erα、Erβ及凋亡相關基因Survivin表達的影響,發(fā)現(xiàn)雌二醇不同劑量和不同給藥途徑之間對晶狀體性狀和基因表達影響的差別,為探索雌二醇抑制白內障的機制提供理論基礎和實驗依據(jù)。
方法:
4、 將60只清潔級健康成年雌性性成熟Wistar大鼠隨機分為6組:
A組.正常對照組(給予假手術,不給予雌二醇干預)
B組.去勢組(給予雙側卵巢切除,不給予雌二醇干預)
C組.去勢+低濃度E2點眼組(雙側卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液50%稀釋液點眼,每日4次)
D組.去勢+高濃度E2點眼組(雙側卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液原液點眼,每日4次)
E組.去勢+低
5、劑量E2注射組(雙側卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液0.200mg.Kg-1.次-1肌肉注射,每3天一次)
F組.去勢+高劑量E2注射組(雙側卵巢切除后,給予苯甲酸雌二醇注射液0.400mg.Kg-1.次-1肌肉注射,每3天一次)
術前、術后及給藥后每周肉眼和裂隙燈顯微鏡觀察各組大鼠晶狀體變化。
觀察6周后用放免法檢測血清中雌二醇濃度并處死大鼠,取其晶狀體分別進行光鏡下組織細胞的形態(tài)觀察,免疫
6、組化SP法觀察雌激素受體Erα、Erα及凋亡相關基因Survivin在晶狀體上皮細胞的表達。實驗數(shù)據(jù)用((-X)±S)表示,應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理。
結果:
1、肉眼及裂隙燈顯微鏡下觀察,各組大鼠晶狀體均未出現(xiàn)空泡、小水裂以及前囊點狀混濁等改變。
2、光鏡下,各組大鼠晶狀體囊膜均勻連續(xù),上皮細胞排列緊密,晶狀體纖維均未出現(xiàn)空泡、小水裂等改變。
3、給藥6周后,去勢
7、+低濃度E2點眼組(C組)、去勢+高濃度E2點眼組(D組)與去勢組(B組)無差別(P>0.05)。去勢+低劑量E2注射組(E組)和去勢+高劑量E2注射組(F組)血清雌二醇平均水平明顯高于B組(P<0.01)。
4、去勢組(B組)的Erα、Erβ免疫反應陽性細胞率(rate)及OD值較正常對照組(A組)明顯下降(P<0.01)。去勢+低濃度E2點眼組(C組)、去勢+高濃度E2點眼組(D組)和去勢+高劑量E2注射組(F組)Er
8、α、Erβ免疫反應陽性細胞的表達較去勢組(B組)明顯增高(P<0.01)。去勢+低劑量E2注射組(E組)Erα、Erβ免疫反應陽性細胞的表達較去勢+高劑量E2注射組(F組)下降(P<0.01)。去勢+低濃度E2點眼組(C組)、去勢+高濃度E2點眼組(D組)和去勢+高劑量E2注射組(F組)間無明顯差別(P>0.05)。
5、Survivin在正常對照組(A組)、去勢組(B組)、去勢+低濃度E2點眼組(C組)和去勢+低劑量E2
9、注射組(E組)未見表達。去勢+高濃度E2點眼組(D組)和去勢+高劑量E2注射組(F組)可見晶狀體上皮細胞Survivin陽性表達。
結論:
1.晶狀體上皮細胞Erα和Erβ的表達水平與體內雌激素的水平有關。雌激素對晶狀體的保護作用是通過雌激素受體產(chǎn)生。
2.晶狀體上皮細胞Survivin的表達水平由體內高水平的外源性雌激素引起。雌激素具有誘導Survivin表達的作用。
3.雌激素
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