極端超微細菌蛋白多糖對動物免疫功能調(diào)節(jié)的研究.pdf

1、多糖廣泛存在于植物、動物和微生物細胞壁和細胞中，是構(gòu)成生命的三大基本物質(zhì)之一，也是具有免疫調(diào)節(jié)活性的生物大分子物質(zhì)。 本項目研究了超微細菌Glaciecol apolaris蛋白多糖(PSK)的常規(guī)水浸提法中不同料液比、提取溫度和時間對多糖得率、粘度和表面張力的影響：同時研究了超聲提取對多糖得率、粘度和表面張力的影響。結(jié)果表明：提取時間對多糖的提取率存在顯著的影響(p<0.05)，用水溶劑浸提細菌多糖，料水比1∶15，提取溫度在

2、100℃左右，提取4h-6h，可獲得較高的多糖得率，最高的得率可達8.08％，同時提取液粘度和表面張力較低。超聲提取能提高PSK的得率，縮短提取時間，降低提取液的粘度和表面張力，有利于降低多糖濃度極化對分離純化過程的阻力，提高處理量。超聲處理條件以選擇10-15min、100W功率，提取4h為宜，最高的得率可達8.82％。 從體內(nèi)抑制試驗和體外培養(yǎng)巨噬細胞的殺瘤試驗對多糖的抑瘤作用進行了研究。體內(nèi)抑瘤試驗采用灌胃方式，計算抑瘤率

3、和生命延長率。體外試驗將巨噬細胞與腫瘤細胞共培養(yǎng)，測定NO濃度與細胞毒效應(yīng)。培養(yǎng)上清液中一氧化氮(NO)濃度采用NO試劑盒檢測，細胞毒效應(yīng)通過MTT比色法檢測。用黃嘌呤氧化酶法測定服用鱉組織漿大鼠腦、肝、血中的超氧化物歧化酶(SOD)含量。結(jié)果表明，超微細菌Glaciecola polaris的蛋白多糖和細菌菌體對機體腫瘤具有不同程度的抑制作用，且能有效地增強機體對腫瘤的抵抗性，延長生命期。從細胞毒效應(yīng)來看，超微細菌Glaciecola

4、polaris的蛋白多糖和細菌菌體能明顯促使M9的活化，從而激發(fā)NO合成顯著增高，細胞毒效應(yīng)增強，促進巨噬細胞對病毒感染細胞的殺傷作用，但這種促Mψ的細胞毒作用隨蛋白多糖濃度的變化呈現(xiàn)一定的變化，高濃度(100uL)要好于低濃度(50uL)；從細菌菌體中提取的蛋白多糖要好于細菌菌體本身。另外，Glaciecola polaris的蛋白多糖還可顯著地提高SOD的活性，而增強機體的免疫能力。 從PSK對受低密度脂蛋白(Ox-LDL)

5、和叔丁基氫過氧化物(tbOOH)等氧化物脅迫的巨噬細胞抗氧化能力進行了體外研究。PSK可有效地保護巨噬細胞減輕氧化損傷，且巨噬細胞克隆刺激因子(M-CSF)也有相似的結(jié)果。經(jīng)PSK處理或M-CSF處理的巨噬細胞的成活率極顯著地高于未經(jīng)處理的巨噬細胞(p<0.01)。經(jīng)PSK處理的巨噬細胞培養(yǎng)基能顯著地提高巨噬細胞克隆刺激因子的分泌(p<0.05)，并能顯著地增加M-CSF的mRNA的表達(p<0.05)。由此推測，PSK能減輕Ox-ID

6、L和tbOOH對巨噬細胞的氧化損傷的作用，是與促進巨噬細胞對M-CSF的表達，提高M-CSF的分泌量相關(guān)聯(lián)。 以水質(zhì)pH為應(yīng)激源，探討超微細菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖對中華鱉免疫和抗應(yīng)激能力的影響。結(jié)果表明，超微細菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖對中華鱉幼鱉血細胞吞噬率、血清溶菌活力和殺菌活力有明顯促進作用(p<0.01)，并對應(yīng)激引起的皮質(zhì)醇有抑制作用。由此可見，超微細菌Glaciecola

7、polaris的蛋白多糖的添加不僅對酸應(yīng)激所致的內(nèi)分泌功能的紊亂有調(diào)整作用，而且對酸應(yīng)激所致的免疫功能低下有保護作用。 研究了蛋白多糖對中華鱉生長性能及免疫功能的影響。選用平均體重50-60g的中華鱉幼鱉300只，隨機分成10組，試驗組在基礎(chǔ)飼料中添加0.05％、0.1％的超微細菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖，或添加0.1％、0.5％的超微細菌菌體粉碎物，對照組以0.5％α-淀粉代替。飼養(yǎng)8周，測定生產(chǎn)性能、免疫