異氟烷在脊髓水平的鎮(zhèn)痛作用及其相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、在科學(xué)技術(shù)迅猛發(fā)展的今天，一種不同于睡眠狀態(tài)，沒(méi)有意識(shí)，沒(méi)有記憶，沒(méi)有本能反映，沒(méi)有疼痛，可逆性的麻醉狀態(tài)之謎仍然懸而未解。全麻作用包括鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、肌松和無(wú)應(yīng)激反應(yīng)四大要素，以往針對(duì)全麻機(jī)理的研究結(jié)果基本上都是反應(yīng)吸入麻醉四大要素的綜合作用，這四者之間既相對(duì)獨(dú)立、又存在復(fù)雜的內(nèi)在聯(lián)系，其對(duì)應(yīng)的中樞作用區(qū)域和神經(jīng)生理機(jī)制也存在較大的差異。多年的采用傳統(tǒng)吸入給藥方法的研究證明，吸入麻醉多種藥理學(xué)效應(yīng)不加區(qū)分綜合研究的結(jié)果是很難取得突破性進(jìn)展

2、。
　　研究目的：
　　本研究率先采用鞘內(nèi)給藥技術(shù)，使異氟烷直接作用于脊髓，同時(shí)綜合應(yīng)用痛行為學(xué)、免疫組織化學(xué)、RT-PCR等研究方法，從脊髓水平直接探索：①異氟烷原液和乳化異氟烷在脊髓水平能否產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用？②異氟烷原液和乳化異氟烷對(duì)脊髓Fos蛋白和c-fosmRNA表達(dá)的影響如何？研究結(jié)果為揭示吸入麻醉藥在脊髓水平的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制提供直接的理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　第一部分：異氟烷原液鞘內(nèi)給藥的鎮(zhèn)痛作用研

3、究成年雄性大鼠隨機(jī)分為6組，每組6只，隨機(jī)均分為：A組：鞘內(nèi)給予生理鹽水50μl/kg；B組：鞘內(nèi)給予異氟烷50μl/kg；C組：鞘內(nèi)給予異氟烷25μl/kg；D組：鞘內(nèi)給予生理鹽水50μl/kg；E組：鞘內(nèi)給予異氟烷50μl/kg；F組：鞘內(nèi)給予異氟烷25μl/kg。A、B和C三組進(jìn)行福爾馬林實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)，D、E和F三組進(jìn)行VonFrey實(shí)驗(yàn)、Hargreaves實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)。
　　第二部分：乳化異氟烷鞘內(nèi)給藥

4、的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制研究成年雄性大鼠隨機(jī)分為6組，每組6只，隨機(jī)均分為：A組：鞘內(nèi)給予生理鹽水50μl/kg；B組：鞘內(nèi)給予乳化異氟烷50μl/kg；C組：鞘內(nèi)給予乳化異氟烷25μl/kg；D組：鞘內(nèi)給予生理鹽水50μl/kg；E組：鞘內(nèi)給予乳化異氟烷50μl/kg；F組：鞘內(nèi)給予乳化異氟烷25μl/kg。A、B和C三組進(jìn)行福爾馬林實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)，D、E和F三組進(jìn)行VonFrey實(shí)驗(yàn)、Hargreaves實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)。

5、　　研究結(jié)果：
　　1.異氟烷原液和乳化異氟烷在脊髓水平鎮(zhèn)痛作用應(yīng)用鞘內(nèi)注射異氟烷原液和乳化異氟烷和痛行為學(xué)相結(jié)合方法研究結(jié)果表明：①給予不同劑量異氟烷原液(50μl/kg和25μl/kg)和乳化異氟烷(50μl/kg和25μl/kg)均能夠明顯抑制福爾馬林誘發(fā)的抬足反射；②給予不同劑量異氟烷原液(50μl/kg和25μl/kg)和乳化異氟烷(50μl/kg和25μl/kg)均能夠顯著延長(zhǎng)熱刺激的反應(yīng)潛伏期；③給予不同劑量異氟烷原

6、液(50μl/kg和25μl/kg)和乳化異氟烷(50μl/kg和25μl/kg)均能夠有效提高機(jī)械刺激的反應(yīng)閾值。
　　2.異氟烷原液和乳化異氟烷對(duì)脊髓Fos蛋白和c-fosmRNA表達(dá)的影響應(yīng)用鞘內(nèi)注射異氟烷原液和乳化異氟烷、免疫組織化學(xué)和RT-PCR相結(jié)合技術(shù)研究結(jié)果表明：①鞘內(nèi)給予不同劑量異氟烷原液(50μl/kg和25μl/kg)和乳化異氟烷(50μl/kg和25μl/kg)均能夠明顯抑制Fos蛋白在脊髓的表達(dá)；②大鼠脊

7、髓腰膨大段處，鞘內(nèi)給予不同劑量的生理鹽水(50μl/kg和25μl/kg)、異氟烷原液(50μl/kg和25μl/kg)和乳化異氟烷(50μl/kg和25μl/kg)。結(jié)果顯示：異氟烷原液和乳化異氟烷各組的c-fosmRNA表達(dá)明顯低于生理鹽水對(duì)應(yīng)組。
　　3.異氟烷原液和乳化異氟烷在脊髓水平鎮(zhèn)痛作用比較①異氟烷原液(50μl/kg)組對(duì)福爾馬林誘發(fā)的大鼠抬足反射的抑制在5min、15min和25～35min強(qiáng)于乳化異氟烷(50μ

8、l/kg)組，而在55～60min則弱于乳化異氟烷(50μl/kg)組；②異氟烷原液(50μl/kg)組在10～15min熱反射潛伏期明顯長(zhǎng)于乳化異氟烷(50μl/kg)組，而在25min熱反射潛伏期明顯短于乳化異氟烷(50μl/kg)組；③異氟烷原液(50μl/kg)組和乳化異氟烷(50μl/kg)組在給藥前大鼠抬足的閾值無(wú)明顯差別，而在給藥10min后的閾值異氟烷原液(50μl/kg)組高于乳化異氟烷(50μl/kg)組；④給予5％

9、福爾馬林50μl2h后大鼠脊髓背角的Fos蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)無(wú)論是在I-II層還是III-VI層，異氟烷原液(50μl/kg)組FLI神經(jīng)元數(shù)目都明顯高于乳化異氟烷(50μl/kg)組；⑤給予5％福爾馬林50μl2h后大鼠脊髓背角的c-fosmRNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)異氟烷原液(50μl/kg)組c-fosmRNA的表達(dá)明顯高于乳化異氟烷(50μl/kg)組，而兩組c-fosmRNA的表達(dá)都明顯低于生理鹽水(50μl/kg)組。
　　研究