以葡聚糖合酶為靶標(biāo)篩選植物病原真菌抑制劑的研究.pdf

1、植物病原真菌嚴(yán)重危害植物，特別是農(nóng)作物的生長(zhǎng)，是造成糧食減產(chǎn)的主要原因之一。真菌細(xì)胞壁由于其結(jié)構(gòu)的特殊性而成為抗真菌劑的理想靶標(biāo)。細(xì)胞壁主要成分之一的β-1,3-葡萄糖由β-1,3-葡聚糖合酶催化合成。該酶的氨基酸序列在真菌中高度保守，以該酶為靶標(biāo)的抑制劑可以達(dá)到廣譜的抗真菌效果。酵母中的β-1,3-葡聚糖合酶催化亞基由兩個(gè)序列高度相似的FKS1和FKS2基因編碼。當(dāng)FKS1缺失時(shí)，酵母細(xì)胞對(duì)葡聚糖合酶抑制劑高度敏感。本文選用了多藥抗性

2、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白調(diào)控基因pdr1缺失的酵母菌株，采用PCR介導(dǎo)的一步基因敲除法，成功敲除了酵母中的FKS1基因，構(gòu)建了以葡聚糖合酶為靶標(biāo)的酵母細(xì)胞篩選模型，通過(guò)對(duì)比兩種酵母對(duì)抑制劑敏感性的差異，初步確定抑制劑的靶向性。實(shí)驗(yàn)建立了雙層平板混合培養(yǎng)法和分組發(fā)酵法，高效篩選土壤中可產(chǎn)該酶抑制劑的微生物。篩選獲得有抗真菌活性的菌株173株，其中菌株ZJA-65的代謝產(chǎn)物對(duì)兩種酵母的抑制效果有顯著的差異。 本文還研究了影響范圍十分廣泛的植物病原真