天然植物中胰脂肪酶抑制劑的篩選.pdf

1、肥胖已經(jīng)嚴(yán)重危害到人類的健康，被WHO明確認(rèn)定為全球最大慢性疾病。每年至少有340萬(wàn)人死于超重和肥胖。面對(duì)如此嚴(yán)峻的形勢(shì)，在過(guò)去幾十年中，研究人員對(duì)肥胖的治療進(jìn)行了大量研究，結(jié)果表明通過(guò)藥物抑制胰脂肪酶(Pancreatic lipase, PL)活性，阻止脂肪水解吸收成為治療肥胖最有效的方法之一，此類藥物僅有奧利司他，但該藥物仍有明顯的副作用，因而開發(fā)出安全，無(wú)毒副作用，可長(zhǎng)期服用的PL抑制劑類減肥藥物成為研究的熱點(diǎn)。當(dāng)前，從資源豐富

2、的天然產(chǎn)物中篩選PL抑制劑是最有效的手段之一，但利用傳統(tǒng)篩選方法進(jìn)行篩選存在許多的缺點(diǎn)，因此人們研究出了利用固定化酶從天然植物中篩選能與之進(jìn)行特異性結(jié)合的化合物的方法，該方法克服了傳統(tǒng)篩選方法的缺陷，減少了天然產(chǎn)物分離和活性篩選的盲目性，節(jié)省了時(shí)間，極大地提高了篩選的命中率。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)連翹葉提取物對(duì)PL有較好的抑制作用，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明其具有減輕肥胖大鼠體重，降低總脂含量和血清中甘油三酯的作用，但有效成分還不確定。本論

3、文在前期實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，首先合成了磁珠固定化胰脂肪酶，然后利用固定化酶對(duì)連翹葉中的PL抑制劑進(jìn)行了系統(tǒng)篩選，最后又對(duì)其它幾種天然植物抑酶作用進(jìn)行了初步研究。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　1.以羧基磁珠為載體，通過(guò)磁珠上羧基與PL上氨基共價(jià)結(jié)合形成酰胺鍵而合成了固定化酶，并利用紅外光譜進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征，然后利用陽(yáng)性抑制劑橙皮苷對(duì)建立的固定化酶篩選模型進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果表明橙皮苷可以特異性結(jié)合到固定化酶上，說(shuō)明所建立的固定化酶篩選模型可

4、用于篩選天然植物提取物中能與PL發(fā)生特異性結(jié)合的化合物。
　　2.以95％乙醇提取連翹葉，并用石油醚萃取法去除葉綠素，然后進(jìn)行系統(tǒng)萃取，最后測(cè)定了各萃取組分對(duì)PL的抑制作用。結(jié)果顯示剩余沉淀組分對(duì)PL抑制作用最好，1.5 mg/mL時(shí)抑制率為81.48%，因此選用該組分作為連翹葉進(jìn)行固定化酶篩選的樣品。此外，還發(fā)現(xiàn)了利用濁點(diǎn)萃取法結(jié)合超聲波可高效提取葉綠素的新方法。
　　3.利用固定化酶篩選模型對(duì)連翹葉最高抑酶活性組分中的P

5、L抑制劑進(jìn)行了系統(tǒng)篩選，并對(duì)篩選出的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定和抑酶作用測(cè)定。最終篩選出9個(gè)與PL有作用的化合物，包括3個(gè)黃酮類(蘆丁、橙皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷)、2個(gè)多酚類(綠原酸、咖啡酸)、2個(gè)木脂素類(連翹苷、牛蒡子苷元)及2個(gè)苯乙醇類(連翹酯苷A及其同分異構(gòu)體)。在確定結(jié)構(gòu)的8個(gè)化合物中，連翹苷對(duì)PL有促進(jìn)作用，其余均為抑制作用，其中山奈酚-3-O-蕓香糖苷抑酶作用最好(IC50：2.9±0.5μmol/L)。抑制類型有競(jìng)爭(zhēng)性