STAT5在哮喘大鼠STATs信號(hào)傳導(dǎo)通路中的作用及其調(diào)控.pdf

1、目的： (1)研究支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘)大鼠STAT5介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路在哮喘急性發(fā)作中的作用； (2)探討STAT5介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路與IL-4、IFN-γ的關(guān)系，以及其對(duì)氣道炎癥形成的影響； (3)研究布地奈德、BCG多糖核酸對(duì)STAT5介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路及IL-4、IFN-γ的調(diào)控作用。 方法：60只雄性SD大鼠隨機(jī)分成4組，分別是哮喘組(A組)、BCG多糖核酸組(B組)、布地奈德組(P組)和正常對(duì)

2、照組(C組)，每組15只。用卵白蛋白(OVA)制備大鼠哮喘模型，C組用不含OVA的氫氧化鋁凝膠代替抗原。各組大鼠于末次激發(fā)后麻醉并取材?？鼓鱁OS計(jì)數(shù)：血漿標(biāo)本用EIASA測(cè)定IL-4和IFN-γ濃度；各組每只大鼠均經(jīng)左肺門(mén)結(jié)扎后右肺行支氣管肺泡灌洗并留取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid，BALF)，對(duì)BALF中的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類(lèi)，同時(shí)用ELISA測(cè)定IL-4和IFN-γ的濃度；SYBRGRE

3、ENI熒光實(shí)時(shí)定量PCR法分別檢測(cè)肺組織和血單個(gè)核細(xì)胞中的STAT5bmRNA與IL-4mRNA的表達(dá)變化；免疫組化技術(shù)檢測(cè)STAT5b蛋白在支氣管上皮細(xì)胞的表達(dá)變化。光鏡下觀察細(xì)支氣管周?chē)装Y浸潤(rùn)情況：透射電鏡(TEM)觀察各組支氣管纖毛上皮細(xì)胞的變化。用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： (1)BALF中的炎癥細(xì)胞情況和血中EOS絕對(duì)值計(jì)數(shù)：A組BALF中細(xì)胞總數(shù)[(4.

4、29±1.52)×109/L]顯著高于C組、B組和P組[分別為(2.01±0.51)×109/L、(3.53±1.01)×109/L、(3.05±0.96)×109/L]，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.01)；A組BALF中的EOS、淋巴細(xì)胞百分比[(13.69±3.61)％、(24.91±6.19)％]分別高于C組[(1.25±0.63)％、(11.73±6.13)％](均為P＜0.01)；B組和P組的BALF中EOS、淋巴細(xì)胞百分比

5、[(6.77±2.09)％、(17.77±4.83)％，(3.80±1_38)％、(16.91±3.25)％]分別低于A組(P＜0.05)。另外，A組血EOS絕對(duì)值[(10.27±3.98)×108/L]分別高于B組、P組和C組[(4.54±2.80)×108/L、(3.95±2.13)×108/L、(1.84±0.95)×108/L](均為P＜0.01)；B組和P組EOS絕對(duì)值均高于C組(P＜0.01)。 (2)肺組織病理學(xué)改

6、變光鏡觀察結(jié)果：A組大鼠肺組織切片HE染色可見(jiàn)支氣管和血管周?chē)仔约?xì)胞浸潤(rùn)，以淋巴細(xì)胞、EOS為主，氣道腔內(nèi)可見(jiàn)黏液栓，氣道上皮多處斷裂；B組和P組的上述改變程度不一，明顯比A組的改變輕；C組則無(wú)上述表現(xiàn)。 (3)肺組織超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果：電鏡下C組顯示支氣管纖毛上皮細(xì)胞的纖毛排列整齊；A組支氣管上皮細(xì)胞纖毛排列稀疏或斷裂：B組和P組支氣管上皮細(xì)胞纖毛排列尚整齊。 (4)血漿及BALF中IL-4、IFN-γ的測(cè)定結(jié)果：A組

7、大鼠血漿和BALF中IL-4濃度為[33.27±8.32、21.90±7.48(pg/ml)]明顯高于B組[18.89±6.07、15.52±4.62(pg/ml)]、P組[17.42±4.01、13.31±4.53(pg/ml)]和C組[12.21±3.76、7.76±3.21(pg/ml)](均為P＜0.01)；B組和P組血漿中IL-4濃度則高于C組(P＜0.05)；B組和P組BALF中IL-4濃度則高于C組(P＜0.01)。A組、

8、P組血漿和BALF中IFN-γ濃度[11.62±3.78、6.91±2.19，19.06±5.59、11.90±4.17(pg/ml)]顯著低于C組[26.31±8.66、18.30±5.52(pg/ml)](P＜0.01)；B組血漿中IFN-γ濃度[21.16±6.72(pg/ml)]低于C組(P＜0.05)；B組BALF中IFN-γ濃度[13.18±4.74(pg/ml)]顯著低于C組(P＜0.01)；B組、P組血漿和BALF中IF

9、N-γ濃度顯著高于A組(P＜0.01)。 (5)各組大鼠肺組織和血單個(gè)核細(xì)胞中STAT5bmRNA和IL-4mRNA的測(cè)定結(jié)果：A組肺組織和血單個(gè)核細(xì)胞中STAT5bmRNA表達(dá)量(56.73±28.00、61.54±44.26)顯著高于B組(27.86±13.56、33.66±19.30)、P組(24.44±9.61、29.90±14.43)和C組(7.59±4.06、5.90±2.85)(均為P＜0.01)：B組(P＜0.0

10、1)和P組(P＜0.05)高于C組；B組和P組的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。A組血單個(gè)核細(xì)胞中IL-4mRNA表達(dá)量(68.88±35.90)顯著高于B組、P組和C組(28.76±13.02、25.64±9.63、7.79±4.79)(均為P＜0.01)；B組(P＜0.01)和P組(P＜0.05)高于C組；B組和P組的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 (6)各組大鼠肺組織中STAT5b蛋白的測(cè)定結(jié)果：A組顯示支氣管上

11、皮細(xì)胞的胞漿呈棕黃色、且著色較深，其吸光度(LD)(0.211±0.070)顯著高于B組(0.113±0.033)、P組(0.107±0.042)和C組(0.048±0.016)(均為P＜0.01)：B組和P組支氣管上皮細(xì)胞STAT5b蛋白表達(dá)量高于C組(P＜0.01)；B組和P組的表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 (7)相關(guān)分析結(jié)果：各組STAT5bmRNA的表達(dá)量與IL-4mRNA表達(dá)量、STAT5b蛋白、IL-4濃度、

12、EOS含量分別呈正相關(guān)，與IFN-γ濃度呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論： (1)哮喘大鼠肺組織和血單個(gè)核細(xì)胞中STAT5bmRNA表達(dá)水平上調(diào)，氣道上皮細(xì)胞及血單個(gè)核細(xì)胞是主要的表達(dá)細(xì)胞；血單個(gè)核細(xì)胞中IL-4mRNA表達(dá)水平也上調(diào)，血和BALF中IL-4水平升高、IFN-γ水平下降。說(shuō)明哮喘時(shí)存在IL-4/STAT5信號(hào)通道過(guò)度激活。 (2)STAT5bmRNA和STAT5b蛋白分別與IL-4mRNA、IL-4水平呈正相關(guān)，