血管內(nèi)皮抑素與順鉑對Calu-6細(xì)胞聯(lián)合作用的觀察.pdf

1、目的：近年來，肺癌的發(fā)病率和死亡率持續(xù)上升，已居各種惡性腫瘤的首位；其中非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占80％左右，而確診時約50％的患者為不可手術(shù)的晚期患者?；熢贜SCLC的綜合治療中占有重要地位，但化療效果差，容易發(fā)生耐藥。1971年Folkman教授首次提出腫瘤血管生成依賴學(xué)說，提出血管生成不僅在腫瘤的生長過程中必需，而且在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移階段也發(fā)揮作用，抗血管生成療法成為腫瘤治療領(lǐng)域的一線曙光。血管內(nèi)皮抑素(Endostatin)

2、為內(nèi)源性血管生成抑制劑，能特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，抑制其生長和遷移、誘導(dǎo)其凋亡，從而抑制血管形成和腫瘤生長。近年來也有研究表明，它還可直接抑制腫瘤細(xì)胞生長、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，但關(guān)于其具體作用機制及信號傳導(dǎo)通路尚不十分清楚。恩度TM(Endostar)是由我國自主研發(fā)的新型重組人血管內(nèi)皮抑素，臨床試驗結(jié)果顯示其具有良好的臨床應(yīng)用前景，且與化療有增效作用，然對其增效機制、作用特點及最佳用法方面的研究尚不十分清楚。我們選用Calu-6人肺

3、腺癌細(xì)胞系，觀察：1、血管內(nèi)皮抑素(下簡稱內(nèi)皮抑素)對肺癌細(xì)胞Calu-6是否具有生長抑制作用、內(nèi)皮抑素是否能夠誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機制。2、內(nèi)皮抑素與順鉑(DDP)的聯(lián)合是否具有協(xié)同作用，如果有，則進(jìn)一步探討最佳聯(lián)合用藥的時間、劑量關(guān)系及可能的相關(guān)機制，以期指導(dǎo)臨床聯(lián)合用藥。3、兩種內(nèi)皮抑素的作用效果有無差異，以期了解各種血管內(nèi)皮抑素對腫瘤細(xì)胞的作用是否具相同機制、指導(dǎo)制定各血管內(nèi)皮抑素的共同用藥原則。 方法：1、MTT法

4、測定各藥物對肺癌細(xì)胞Calu-6的生長抑制率。2、流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及壞死率。3、ELISA檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2/Bax、sFas/sFasL)的表達(dá)。 結(jié)果：內(nèi)皮抑素具有抑制Calu-6細(xì)胞增殖的作用(P<0.05)并呈現(xiàn)時間依賴性、與劑量無明顯依賴、但存在最佳作用濃度；其還可誘導(dǎo)Calu-6細(xì)胞凋亡、下調(diào)Bcl-2表達(dá)、但對Bax的表達(dá)無明顯影響、也未檢測到sFas/sFasL的表達(dá)。在內(nèi)皮抑素與DDP聯(lián)合用

5、藥方案中，同時給藥較單藥DDP誘導(dǎo)凋亡及下調(diào)Bcl-2表達(dá)明顯，序貫給藥與單藥DDP間無明顯差異。恩度、內(nèi)皮抑素的作用效果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：1、恩度、內(nèi)皮抑素與DDP對Calu-6細(xì)胞均具有生長抑制作用，DDP呈現(xiàn)明顯的時間和劑量依賴性，恩度和內(nèi)皮抑素在一定范圍內(nèi)具有明顯時間依賴性、而劑量依賴關(guān)系不明顯。但恩度與內(nèi)皮抑素存在一最佳作用濃度，未達(dá)到或超過該最佳作用濃度時的抗腫瘤作用可能均不能得到最大發(fā)揮。2、恩度、內(nèi)皮抑素

6、與DDP均能誘導(dǎo)Calu-6細(xì)胞凋亡、下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，對Bax的表達(dá)無明顯影響。恩度與內(nèi)皮抑素的單獨作用效果弱于DDP單藥；各聯(lián)合給藥方案中，序貫給藥較DDP單藥作用無明顯差異，以同時給藥誘導(dǎo)凋亡及下調(diào)Bcl-2的表達(dá)最明顯。實驗各組均未檢測到對Fas/FasL的表達(dá)，關(guān)于其是否通過Fas/FasL途徑誘導(dǎo)凋亡尚不能明確，有待進(jìn)一步的深入研究。3、恩度與內(nèi)皮抑素在抑制Calu-6細(xì)胞生長、誘導(dǎo)其凋亡、下調(diào)Bcl-2的表達(dá)等方面作用