丹酚酸B對(duì)心肌缺血大鼠血管新生及對(duì)正常大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)張力的影響.pdf

1、目的：觀察丹酚酸B（SalvianolicacidB，簡稱SalB）體外對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECS)增值、遷移和管腔形成的影響，SalB對(duì)心肌缺血大鼠血管新生的影響及作用機(jī)制；觀察SalB的血管舒張作用并探索其作用機(jī)制。
　　 方法：1．(1)取對(duì)數(shù)期生長的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECS)，用MTT法觀察SalB對(duì)HUVECS活力和增殖的影響；用3H摻入法檢測(cè)SalB對(duì)HUVECSDNA合成率的影響；細(xì)胞劃痕法檢測(cè)Sa

2、lB對(duì)細(xì)胞遷移距離的影響；Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SalB對(duì)細(xì)胞劃痕遷移的作用；用體外毛細(xì)血管管腔結(jié)構(gòu)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SalB對(duì)HUVECS管腔形成的影響；(2)將HUVECS用SalB處理12h、24h、48h后，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定HUVECS上清中VEGF的含量；用試劑盒測(cè)定HUVECS上清中NO和NOS的含量；將HUVECS用SalB處理24h和48h后收集細(xì)胞，WesternBlot檢測(cè)HUVECS中VEGF的表達(dá)；

3、(3)結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈左降支建立大鼠心肌缺血模型，每組大鼠分別尾靜脈注射SalB1.6、3.2和6.4mg/kg，空白組，假手術(shù)組和模型組給予同等體積的生理鹽水。測(cè)定給藥后血清VEGF的含量；測(cè)定心肌組織勻漿中NO、NOS、VEGF的含量；測(cè)定缺血心肌的梗死面積；取心臟缺血區(qū)域做組織病理學(xué)檢測(cè)；通過免疫組化法測(cè)定梗死邊緣區(qū)新生血管數(shù)(MVC)。
　　 2．制備大鼠離體胸主動(dòng)脈環(huán)，通過給藥觀察SalB對(duì)離體胸主動(dòng)脈環(huán)的直接作用；(

4、1)觀察SalB對(duì)NE收縮血管環(huán)的影響：①先加入10-6mol/LNE收縮血管，再加入不同濃度的SalB觀察其對(duì)收縮血管的舒張能力；②用不同濃度的SalB對(duì)血管預(yù)處理15min再加入106mol/LNE收縮血管，觀察最大收縮張力；③用累積加藥法加入不同濃度的NE，記錄不同濃度NE的收縮曲線，然后沖洗血管，待穩(wěn)定后，先加入不同濃度的SalB預(yù)處理，然后累積加入不同濃度的NE，記錄其收縮曲線，觀察其收縮曲線的變化；(2)觀察SalB對(duì)KCl

5、收縮血管環(huán)的影響：①先加入60mmol/LKCl收縮血管，再加入不同濃度的SalB觀察其對(duì)收縮血管的舒張能力；②先用不同濃度的SalB對(duì)血管預(yù)處理再加入60mmol/LKCl收縮血管，觀察最大收縮張力；③用累積加藥法加入不同濃度的KCl，記錄不同濃度KCl的收縮曲線，然后沖洗血管，待穩(wěn)定后，先加入不同濃度的SalB預(yù)處理，然后累積加入不同濃度的KCl，記錄其收縮曲線，觀察其收縮曲線的變化；(3)觀察SalB對(duì)CaCl2收縮血管環(huán)的影響：

6、先通過累積加入不同濃度CaCl2得到CaCl2收縮曲線，然后用不同濃度SalB預(yù)處理后再加入不同濃度CaCl2得到CaCl2收縮曲線，觀察SalB對(duì)收縮曲線的變化；(4)觀察SalB對(duì)NE引起的依賴于細(xì)胞外鈣和內(nèi)鈣的收縮反應(yīng)的影響；(5)通過加入不同的抑制劑來探討SalB舒張血管環(huán)作用是否與內(nèi)皮和鉀離子通道有關(guān)；(6)通過加入β受體阻斷劑來觀察SalB舒血管作用是否與β受體有關(guān)。
　　 結(jié)果：1:(1)3H摻入法，結(jié)果顯示Sal

7、B在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)HUVECS增殖作用明顯；細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell結(jié)果表明SalB對(duì)HUVECS遷移有明顯的促進(jìn)作用；管腔形成實(shí)驗(yàn)顯示，SalB作用HUVECS后可以使管腔形成數(shù)增多，管腔長度增長；(2)HUVECS經(jīng)SalB處理后，HUVECS上清中VEGF、NO和NOS含量增加，VEGF表達(dá)上調(diào)；(3)SalB可以使心肌組織中NO、NOS和VEGF含量增加，同時(shí)血清中VEGF含量也增加；SalB能夠減少心肌梗死面積，增加

8、缺血區(qū)域和非缺血區(qū)域的血管新生。2：直接加入SalB后發(fā)現(xiàn)SalB對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下胸主動(dòng)脈無明顯的直接作用；SalB能明顯抑制NE的收縮，使NE的收縮曲線右移；SalB對(duì)KCl的收縮無明顯影響；SalB能使無鈣高鉀中CaCl2引起的收縮曲線明顯右移；經(jīng)無鈣液處理后SalB能阻斷NE誘發(fā)的外鈣收縮和內(nèi)鈣收縮；SalB舒張血管作用與內(nèi)皮、鉀離子通道和β受體無關(guān)。
　　 結(jié)論：(1)SalB在體外能促進(jìn)HUVECS的增值、遷移和管腔形成，