SPT對離體大鼠胸主動脈環(huán)和血管平滑肌細胞電流的影響.pdf

1、目的：螺內(nèi)酯（spironolactone，SPT）又名安體舒通，已被用來作為一個保鉀利尿劑超過30年，它是一種人工合成的17-內(nèi)酯的類固醇的ALD拮抗劑。在臨床上它本身的降壓作用比較弱，但其抗高血壓的作用已經(jīng)被充分肯定；SPT也已被證明可以減少心臟衰竭（HF）患者的死亡率，改善HF患者的心房傳導(dǎo)和重塑，對心血管系統(tǒng)有很好的保護作用。但其在離體血管平滑肌的研究未見報道。也有研究報道SPT對成纖維細胞的Kv通道有影響，同時觀察到SPT類似

2、于鈣阻滯劑的方式作用于緩慢的鈣通道。但是關(guān)于SPT對主動脈血管平滑肌的鉀電流和鈣電流有何影響未見報道。本實驗分別從離體器官和細胞水平來研究SPT舒張血管的作用機制。
　　方法：離體血管平滑肌張力記錄法：首先用脫臼法處死大鼠，打開胸腔迅速分離胸主動脈，將取下來的大鼠胸主動脈放入事先準(zhǔn)備好的4℃生理鹽溶液中，修剪主動脈周圍組織，并將其剪成2-3mm的血管環(huán)。血管環(huán)管腔用不銹鋼掛鉤穿過，使血管環(huán)水平懸掛在10ml的PSS液浴管中，用一根

3、細的鋼絲與張力換能器相連，使用Powerlab生物信號測定系統(tǒng)來記錄血管環(huán)的張力變化情況。浴槽中供氧（95％氧氣與5%二氧化碳的混合而成），前負(fù)荷2g，在37℃的PSS液中每隔20分鐘換液1次，平衡1小時后，應(yīng)用SPT，觀測其對SpragueDawley（SD）大鼠對離體胸主動脈環(huán)的作用及不同工具藥的影響。膜片鉗全細胞記錄法：脫臼法處死大鼠后，立刻取出胸主動脈，鈍性分離，分離出含有血管平滑肌細胞的懸液，選擇邊緣清晰的細胞來進行膜片鉗實驗

4、，記錄細胞膜電流，研究螺內(nèi)酯（SPT）對正常大鼠胸主動脈血管平滑肌鉀電流和鈣電流的影響。實驗結(jié)果的數(shù)據(jù)除了特殊標(biāo)明外均用sx±來表示，所得到的數(shù)據(jù)利用SPSS11.0的統(tǒng)計軟件進行兩獨立樣本t檢驗。
　　結(jié)果：（1）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對靜息狀態(tài)下的離體胸主動脈血管環(huán)無顯著作用。（2）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）

5、誘發(fā)的血管環(huán)的收縮有濃度依賴性的舒張作用，與溶劑對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（3）SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）對KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）誘發(fā)去內(nèi)皮血管的收縮也能產(chǎn)生濃度依賴性的舒張作用，與內(nèi)皮完整組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。（4）在KCl（30mmol·L-1）預(yù)收縮血管環(huán)的基礎(chǔ)上，加入Na+/H+交換阻滯劑氨氯吡咪（AM,amiloride,1μm

6、ol·L-1)，對SPT（1×10-5~2×10-4mol·L-1）引起的離體動脈血管環(huán)的舒張有明顯的抑制作用，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（5）在KCl（30mmol·L-1）預(yù)收縮血管環(huán)的基礎(chǔ)上，加入鉀通道阻斷劑氯化鋇(BaCl2,2μmol·L-1)、四乙胺(TEA,0.2mol·L-1)、四氨基吡啶(4-AP,1mmol·L-1)對SPT的舒張血管的作用無明顯抑制，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

7、而ATP敏感鉀通道（KATP）格列苯脲(Gli,10μmol·L-1)能明顯抑制SPT對離體動脈血管的舒張作用，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（6）在無鈣的生理鹽溶液中，用2×10-4mol·L-1的SPT預(yù)孵20分鐘后，加入1μmol·L-1的NE，發(fā)現(xiàn)血管出現(xiàn)了短暫的收縮，待其平穩(wěn)后，再加入2.5mmol·L-1的CaCl2，發(fā)現(xiàn)血管繼續(xù)收縮。對照組用溶劑預(yù)孵。結(jié)果顯示，在無鈣的PSS溶液中，SPT對NE收縮血管無明

8、顯抑制作用，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；SPT對CaCl2收縮血管有顯著抑制作用，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（7）SPT（2×10-4mol·L-1）對胸主動脈VSMC的鉀電流無明顯影響，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（8）SPT（2×10-4mol·L-1）對胸主動脈VSMC的鈣電流有明顯的抑制作用，與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論1、SPT對靜息狀態(tài)下

9、的離體大鼠胸主動脈環(huán)無作用。2、SPT對KCl（30mmol·L-1）或NE（1×10-6mol·L-1）預(yù)收縮的內(nèi)皮完整和去內(nèi)皮的大鼠離體胸主動脈血管環(huán)都有濃度依賴性的舒張作用。3、SPT對離體胸主動脈血管環(huán)的舒張作用與Na+/H+交換有關(guān)。4、SPT對離體胸主動脈環(huán)的舒張作用與KiR通道、KCa通道和KV通道無關(guān)，與KATP通道有關(guān)。5、SPT可通過抑制外鈣內(nèi)流來舒張血管。6、SPT（2×10-4mol·L-1）對胸主動脈VSMC的