飼料中氨基酸的HPLC檢測方法研究.pdf

1、飼料中的氨基酸是畜禽的重要營養(yǎng)物質(zhì)，動物對蛋白質(zhì)的需求實際上是對氨基酸的需求。飼料中含有的氨基酸種類和含量是判定飼料質(zhì)量高低的重要指標(biāo)。因此，飼料中氨基酸的準(zhǔn)確分析、測定十分重要。但氨基酸分析誤差較大，可能是由于不同的水解條件和不同的分析方法所造成的。氨基酸的分析測定是一個復(fù)雜的過程，所以需要建立一套完善的飼料中氨基酸的檢測方法。
　　蛋白質(zhì)的氨基酸分析分成三大步驟，第一，把蛋白質(zhì)徹底的水解為游離的氨基酸混合物;第二，用色譜的方法

2、把混合的氨基酸分離成單個的氨基酸;第三，測定每個氨基酸的含量。目前，采用常規(guī)的酸水解法測定蛋白質(zhì)氨基酸的含量，因為色氨酸在酸水解過程中幾乎都被破壞，無法與其他的氨基酸一起測定，所以只能單獨測定。
　　本研究分為兩大部分，一部分是柱前衍生高效液相色譜法測定飼料中的氨基酸;另一部分是高效液相色譜法測定飼料中的色氨酸。具體內(nèi)容如下:
　　本試驗建立了以2，4-二硝基氯苯為柱前衍生劑的高效液相色譜法測定飼料中的氨基酸。通過對前處理條

3、件中酸解劑、酸樣比、鹽酸濃度、水解溫度、水解時間、通氮氣、微波水解時間、微波水解溫度、微波水解與常規(guī)水解的比較，衍生條件中衍生劑用量、衍生反應(yīng)時間、衍生反應(yīng)溫度、衍生反應(yīng)緩沖液、衍生反應(yīng)緩沖液pH，色譜條件中色譜柱、緩沖液、緩沖液pH、緩沖液濃度、三乙胺加入量、洗脫程序、流速、色譜柱溫度、有機(jī)洗脫溶劑、檢測波長進(jìn)行研究，建立了19種氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)范圍為0.9901～0.9993;檢出限為0.69～5.70mg/L;加標(biāo)回收

4、率為91.9％～110.7％。結(jié)果表明，本方法操作簡單，無干擾，具有較好的準(zhǔn)確度和較高的靈敏度，能夠滿足飼料中氨基酸的定量分析。
　　本試驗還建立了高效液相色譜法測定飼料中的色氨酸。通過對前處理條件中堿解劑種類、堿解劑濃度、堿解劑用量、堿解時間、堿解溫度、通氮氣，色譜條件中緩沖液、流動相pH、有機(jī)洗脫溶劑、流動相組成、流動相流速、色譜柱溫度、檢測波長的研究，建立了色氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)為0.9998;檢出限為0.11mg/L