Cystamine對(duì)全腦缺血大鼠海馬神經(jīng)元凋亡相關(guān)蛋白核磷蛋白表達(dá)的研究.pdf

1、目的：①研究大鼠全腦缺血再灌注模型不同時(shí)間點(diǎn)凋亡相關(guān)蛋白核磷蛋白(NPM)在海馬的表達(dá)；②缺血再灌注后應(yīng)用Cystamine(CYS)對(duì)核磷蛋白表達(dá)水平的影響；③從而探討全腦缺血時(shí)Cystamine保護(hù)腦組織的可能機(jī)制。
　　 材料和方法采用4血管阻斷法制作大鼠全腦缺血模型，腦電圖驗(yàn)證成功與否。78只成年雄性SD大鼠（模型成功率75％，死亡后補(bǔ)充動(dòng)物），體重280-320g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、全腦缺血組(GI)、全腦

2、缺血+Cystamine治療組(GI+CYS)3組，其中Sham組6只，GI組、GI+CYS組各36只。GI組和GI+CYS組各按照再灌注后6小時(shí)、12小時(shí)、1天、3天、5天和7天隨機(jī)分為6亞組，每亞組6只大鼠。其中GI+CYS組于雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉I0分鐘后立即給予CYS(150mg/kg)腹腔注射，缺血時(shí)間在24小時(shí)內(nèi)的只在缺血后給予一次CYS(150mg/kg)腹腔注射，超過1天的每天在初次注射的相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)再各給予CYS(150mg

3、/kg/day)腹腔注射。Sham組僅暴露兩側(cè)椎動(dòng)脈及頸總動(dòng)脈，不予電凝及夾閉，每天給予生理鹽水Iml腹腔注射，于第3天處死。GI組每天給予等劑量生理鹽水腹腔注射。將GI組和GI+CYS組大鼠分別在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，麻醉后斷頭取腦的海馬組織。
　　 蛋白免疫印跡方法檢測再灌注后不同時(shí)間點(diǎn)海馬核磷蛋白表達(dá)水平的變化。使用ImageJ分析電泳條帶灰度比。
　　 所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)的形式表示，數(shù)據(jù)用SPSS11.5

4、軟件包做統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果蛋白免疫印跡(WESTERN BLOT)：應(yīng)用抗NPM的抗體對(duì)經(jīng)SDS-PAGE并轉(zhuǎn)膜的樣品進(jìn)行免疫檢測，應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法(ECL)進(jìn)行顯色后在分子量37kD附近得到1條單一蛋白條帶。Sham組海馬有一定數(shù)量的NPM表達(dá)；GI組再灌注6小時(shí)后，海馬NPM的表達(dá)較Sham組減弱，12小時(shí)后海馬NPM表達(dá)增加，1天達(dá)高峰，后逐漸下降，3天、5天保持較高的水平；GI組與Sham組比較其

5、1天、3天、5天亞組的NPM表達(dá)均明顯升高，NPM條帶相對(duì)較深，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：GI+CYS組再灌注6小時(shí)后，NPM表達(dá)水平即開始升高，12小時(shí)后NPM的表達(dá)開始明顯增加，也在1天達(dá)高峰，后雖呈下降趨勢，但再灌注7天仍維持在較高水平；仍高于假手術(shù)組；與GI組相比，1天、3天、5天、7天亞組NPM的表達(dá)顯著升高，NPM條帶較深，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，12小時(shí)亞組NPM的表達(dá)水平略高于GI組，NPM條帶相對(duì)較深，計(jì)