類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血IL-37的檢測(cè)及促炎物質(zhì)對(duì)HFLS IL-37mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.研究促炎物質(zhì)對(duì)人滑膜成纖維細(xì)胞（human fibroblast-like synovicyte，HFLS），白細(xì)胞介素-37（interleukin-37，IL-37）表達(dá)的影響。
　　 2.檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）患者外周血IL-37表達(dá)水平，探討其臨床意義。
　　 [方法]
　　 1.用TNF-α（30 ng/ml）分別作用HFLS4 h

2、、12h、24h、36h、48 h后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TNF-α作用不同時(shí)間對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)的影響。分別用1 ng/ml、10 ng/ml、30 ng/ml、100 ng/ml等不同濃度的TNF-α刺激HFLS24h，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)不同濃度TNF-α的刺激對(duì)HFLS IL-37mRNA表達(dá)的影響。
　　 2.用LPS（10μg/ml）分別作用HFLS4 h、12h、24 h、36h、48 h

3、后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)LPS作用HFLS不同時(shí)間對(duì)其IL-37 mRNA表達(dá)的影響。分別用0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、30μg/ml等不同濃度的LPS刺激HFLS24h，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)不同濃度LPS的刺激對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)的影響。
　　 3.分別收集活動(dòng)期和穩(wěn)定期RA患者外周血各30份，以健康體檢者外周血為對(duì)照組。分離外周中的血清和單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、檢測(cè)PBMC中IL-37 mRNA的表達(dá)水平;用ELISA檢測(cè)血清中IL-37的水平，并分別用免疫透射比濁法和電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)血清中的類風(fēng)濕因子（RF）和抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(CCP)，對(duì)其臨床意義進(jìn)行初步分析。
　　 [結(jié)果]
　　 1.TNF-α作用HFLS后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示當(dāng)用TNF-α（30 ng/ml）作用HFLS4 h，其IL-37 mRNA表達(dá)水平顯著升高，與對(duì)照組比較具有顯著性差異

5、(P＜0.05)，當(dāng)作用HFLS12 h后，其IL-37 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)，作用24 h時(shí)其表達(dá)水平到達(dá)高峰，其后則呈下降趨勢(shì)。而不同濃度TNF-α對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)的影響作用結(jié)果顯示，隨著TNF-α作用濃度的增加，其IL-37 mRNA表達(dá)水平隨之增加，呈劑量依賴性。低濃度TNF-α(1 ng/ml)的刺激對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)水平的影響與對(duì)照組相比較無顯著

6、性差異(P＞0.05)，而用10 ng/ml、30 ng/ml、100 ng/ml等較高濃度的TNF-α刺激HFLS時(shí)，其IL-37 mRNA的表達(dá)水平則顯著升高，與對(duì)照組相比較具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 2.LPS作用HFLS后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示當(dāng)用LPS(10μg/ml)作用HFLS4 h，其IL-37 mRNA表達(dá)水平顯著升高，與對(duì)照組比較具有顯著性差異（P＜0.05），當(dāng)作用HFLS12

7、 h后，其IL-37 mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)，作用24 h時(shí)其表達(dá)水平到達(dá)高峰，其后則呈下降趨勢(shì)。而不同濃度LPS對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)的影響作用結(jié)果顯示，隨著LPS作用濃度的增加，其IL-37 mRNA表達(dá)水平隨之增加，呈劑量依賴性。低濃度LPS（0.1μg/ml）的刺激對(duì)HFLS IL-37 mRNA表達(dá)水平的影響與對(duì)照組相比較無顯著性差異(P＞0.05)，而用1μg/ml、10

8、μg/ml、30μg/ml等較高濃度的LPS刺激HFLS時(shí)，其IL-37 mRNA的表達(dá)水平則顯著升高，與對(duì)照組相比較具有非常顯著性差異(P＜0.01)。
　　 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)PBMC中IL-37 mRNA表達(dá)水平的結(jié)果顯示，RA患者PBMC中IL-37 mRNA表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，而RA活動(dòng)期患者PBMC IL-37 mRNA表達(dá)水平又顯著高于穩(wěn)定期患者的表達(dá)水平(P＜0.05)。
　

9、　 4.ELISA檢測(cè)血清中IL-37水平的結(jié)果顯示，RA患者血清中IL-37的水平顯著高于正常對(duì)照組(P＜0.05)，而RA活動(dòng)期患者血清中IL-37水平又顯著高于穩(wěn)定期患者(P＜0.05)。與血清中RF和抗CCP抗體水平的比較分析顯示，RA患者血清中IL-37的水平與RF及抗CCP水平皆成正相關(guān)（r值分別為0.384，0.468,P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.TNF-α和LPS等促炎物質(zhì)能夠上調(diào)HFL