納米級(jí)二氧化鈦對(duì)雌性體外生殖毒性的研究.pdf

1、本研究采用大鼠腔前卵泡體外培養(yǎng)方法，研究納米級(jí)TiO2對(duì)卵泡生長(zhǎng)發(fā)育及卵母細(xì)胞成熟的影響。在此基礎(chǔ)上研究納米級(jí)TiO2對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞增殖的作用及其是否可以引起卵母細(xì)胞染色體產(chǎn)生畸變。目的是進(jìn)一步研究納米級(jí)TiO2有無(wú)雌性生殖毒性，為其安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。 一、納米級(jí)二氧化鈦對(duì)體外大鼠腔前卵泡生長(zhǎng)發(fā)育成熟的影響 目的：采用大鼠腔前卵泡培養(yǎng)方法研究納米級(jí)TiO2對(duì)大鼠卵泡發(fā)育及卵母細(xì)胞成熟的影響。 方法機(jī)械性分離大鼠

2、腔前卵泡，單個(gè)卵泡在96孔板中連續(xù)培養(yǎng)。將卵泡隨機(jī)分為5組：3個(gè)25nmTiO2試驗(yàn)組(12.5μg/ml、25μg/ml和50μg/ml)，陰性對(duì)照組，常規(guī)TiO2組。培養(yǎng)d10天誘導(dǎo)排卵，觀察卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟情況。 結(jié)果：隨著納米級(jí)TiO2劑量增加卵泡存活率、有腔形成率及COCs排出率有下降的趨勢(shì)(P＜0.05)。與陰性對(duì)照組相比，常規(guī)TiO2組對(duì)卵泡發(fā)育與卵母細(xì)胞成熟無(wú)明顯影響(P＞0.05)。與陰性對(duì)照組及常規(guī)Ti

3、O2組比，納米級(jí)TiO2在25μg/mL以上劑量組的卵泡存活率及有腔形成率明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0125)；各組COCs排出率之間兩兩差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0125)。50μg/mL納米級(jí)TiO2組處于成熟階段的卵母細(xì)胞比例減少，與陰性對(duì)照組及常規(guī)TiO2組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0125)。 結(jié)論：25μg/mL劑量以上納米級(jí)TiO2可以抑制體外大鼠腔前卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育，50μg/mL納米級(jí)TiO2可

4、以抑制卵母細(xì)胞成熟，而常規(guī)TiO2對(duì)卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育和卵母細(xì)胞的成熟無(wú)明顯影響。 二、納米級(jí)二氧化鈦對(duì)大鼠卵泡顆粒細(xì)胞增殖的作用 目的：研究納米級(jí)TiO2對(duì)體外大鼠卵泡顆粒細(xì)胞增殖的影響。 方法：本研究用21～23日齡SD雌性大鼠，皮下注射孕馬血清，48h后收集卵巢顆粒細(xì)胞，用DMEM-F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。不同濃度的納米級(jí)TiO2(25μg/ml、50μg/ml和100μg/ml)作用于顆粒細(xì)胞24h及48h后，用C

5、CK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果：納米級(jí)TiO2作用顆粒細(xì)胞后，可影響顆粒細(xì)胞形態(tài)，使部分細(xì)胞不能貼壁。25nmTiO2對(duì)顆粒細(xì)胞的增殖有抑制作用，隨著劑量的增加，抑制率增加。高劑量組在作用24h和48h后抑制率分別為70.87％與65.73％。隨著劑量的增加，顆粒細(xì)胞的存活率逐漸下降，24h與48h的劑量-效應(yīng)曲線變化趨勢(shì)一致。 結(jié)論：25μg/mL劑量以上納米級(jí)TiO2可以抑制體外卵泡顆粒細(xì)胞的增殖。 三、

6、納米級(jí)二氧化鈦對(duì)體外大鼠卵母細(xì)胞染色體的影響 目的：研究納米及常規(guī)TiO2是否可以引起卵母細(xì)胞染色體畸變。 方法：本研究在第一部分的基礎(chǔ)上，收獲陰性對(duì)照組，常規(guī)TiO2組和50μg/ml25nm TiO2組卵母細(xì)胞。用1％檸檬酸鈉低滲30min。用冰醋酸：甲醇在載玻片上固定卵母細(xì)胞。Giems染色30min。自來(lái)水沖洗，干燥后觀察。 結(jié)果：各組染色體畸變率均小于5％，與陰性對(duì)照相比，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.0