β2腎上腺素受體激動劑克侖特羅對PC12細(xì)胞的損傷作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分β2腎上腺素受體激動劑克侖特羅對PC12細(xì)胞的損傷作用
　　 目的：采用PC12細(xì)胞觀察克侖特羅對其損傷作用。
　　 方法：采用MTT 比色法檢測細(xì)胞存活率；LDH 法檢測培養(yǎng)液上清LDH漏出量；Hoechst33342熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)果：（1）β2-AR激動劑克侖特羅對PC12細(xì)胞的生長具有明顯的抑制效應(yīng)，該作用可被特異性β2-AR阻斷劑ICI 118551所阻斷；（2）克侖

2、特羅可升高PC12細(xì)胞培養(yǎng)液上清LDH 水平，ICI 118551對其具有抑制作用；（3）Hoechst33342熒光染色法顯示克侖特羅可誘導(dǎo)PC12細(xì)胞凋亡，ICI 118551可減輕克侖特羅誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
　　 結(jié)論：克侖特羅可通過激動β2-AR對PC12細(xì)胞具有損傷作用。
　　 第二部分 NO 信號通路在克侖特羅對PC12細(xì)胞損傷中的作用
　　 目的：探討NO 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在克侖特羅對PC12細(xì)胞損傷

3、中的作用。
　　 方法：MTT 比色法檢測經(jīng)NO 阻斷劑L-NAME 處理后的細(xì)胞存活率；LDH試劑盒檢測其上清LDH 漏出量；NO 試劑盒檢測其NO 釋放量；AnnexinV-PI 雙染色觀察其形態(tài)學(xué)改變；Western Blot 檢測Caspase-3、iNOS蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果：（1）克侖特羅可促進(jìn)PC12細(xì)胞NO 合成，伴有iNOS表達(dá)水平增加，該作用可被一氧化氮合酶抑制劑L-NAME 阻斷；（2）L-NA

4、ME 對克侖特羅降低細(xì)胞存活率及促細(xì)胞凋亡具有抑制作用。
　　 結(jié)論：NO 信號途徑可能參與克侖特羅對PC12細(xì)胞的損傷作用。
　　 第三部分 ERK1/2信號通路在克侖特羅對PC12細(xì)胞損傷的作用
　　 目的：探討ERK1/2信號通路在克侖特羅對PC12細(xì)胞損傷中的作用。
　　 方法：MTT 比色法檢測細(xì)胞存活率；Western Blot 檢測PC12細(xì)胞ERK 磷酸化和Caspase-3蛋白表達(dá)水平。