環(huán)境致癌物黃曲霉毒素B1轉(zhuǎn)化大鼠肝干細(xì)胞的表達(dá)譜分析.pdf

1、黃曲霉毒素B1(AFBl)是自然界中廣泛存在的環(huán)境污染物,它的長期暴露是肝癌發(fā)生的主要危險(xiǎn)因素之一。本研究利用干細(xì)胞與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,研究了環(huán)境致癌物AFB1誘導(dǎo)肝干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,并采用基因芯片技術(shù)從整體水平上刻畫轉(zhuǎn)化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組變化特征,對于理解環(huán)境污染物致癌機(jī)理具有非常重要的意義。
　　首先,大鼠肝卵圓細(xì)胞WB-F344經(jīng)黃曲霉毒素B1(0.03μM、0.1μM和0.2μM)作用下發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化細(xì)胞出現(xiàn)大量轉(zhuǎn)化灶;轉(zhuǎn)

2、化灶細(xì)胞排列紊亂、重疊交叉生長、喪失了接觸抑制;軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆形成率分別為0.8％、1.3%和2%;同時,肝干細(xì)胞特異基因YP、Vimentin、AFP、CK18等具有顯著改變,表明AFB1成功誘導(dǎo)WB-F344惡性轉(zhuǎn)化。
　　應(yīng)用大鼠全基因表達(dá)譜芯片對轉(zhuǎn)化細(xì)胞基因表達(dá)譜進(jìn)行檢測。共獲1315個顯著差異基因,且基因的下調(diào)表達(dá)趨勢占據(jù)了主導(dǎo)地位。通過差異表達(dá)基因聚類分析發(fā)現(xiàn)AFB1在中高劑量下對肝干細(xì)胞作用類似

3、;并從整體水平來看,基因在各組中的差異表達(dá)趨勢以一致上調(diào)或一致下調(diào)居多。通過功能分析發(fā)現(xiàn),差異表達(dá)基因功能類主要集中于在生物過程類上,顯示肝干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的發(fā)生與生物過程極為相關(guān),其中細(xì)胞遷移、黏附、炎癥反應(yīng)等這些GO與肝干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。通過通路分析發(fā)現(xiàn),不同劑量作用下顯著改變(p<0.05)的通路主要集中在MAPK信號通路、粘著斑通路、肌動蛋白細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)通路等。表明肝干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化可能通過影響這些通路上的關(guān)鍵基因造成的。最后

4、,通過差異表達(dá)基因作用網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn),不同劑量作用下的核心基因主要集中在MET、CCL2、ITGA1、EGFR、COL1A1、ELN等,表明這些基因在肝干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中具有重要作用。
　　另外,本研究采用的芯片所有內(nèi)含質(zhì)量控制指標(biāo)均達(dá)到了Phalanx的控制標(biāo)準(zhǔn),樣本相關(guān)性和主成分分析均顯示了所期望的相關(guān)模式;同時應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)對芯片數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。本研究中所檢測到的基因能夠真實(shí)有效地反映它們表達(dá)的變化情況,數(shù)據(jù)具有較