康復(fù)訓(xùn)練對帕金森病小鼠行為學(xué)的作用及機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　 帕金森病(Parkinson's Disease，PD)是一種常見于中老年人的慢性進行性神經(jīng)變性疾病，其主要的臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、肌強直、運動障礙以及平衡障礙，其主要的病理特征為黑質(zhì)致密部多巴胺能神經(jīng)元的缺失以及黑質(zhì)-紋狀體通路的變性。隨著社會人口老齡化的進程加快，此病患病人數(shù)逐年增加，因此，對該病的研究已引起人們的廣泛關(guān)注。帕金森病的發(fā)病機制至今仍不明確，有研究顯示PD患者黑質(zhì)致密部多巴胺(dopamin

2、e，DA)能神經(jīng)元嚴重缺乏，黑質(zhì)和紋狀體DA減少，酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)的活性下降。DA是調(diào)節(jié)人體運動功能的重要分子，因此DA水平降低是引起PD患者運動障礙的主要原因。TH是DA合成的限速酶，因此增加TH的數(shù)量，提高TH的活性，可促進多巴胺能神經(jīng)生長，保護多巴胺能神經(jīng)的功能，提高PD患者運動能力。膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)在星形膠質(zhì)

3、細胞(Astrocyte，Ast)中含量豐富，在活性星形膠質(zhì)細胞中GFAP的表達相對更多。各種腦損害均可刺激星形膠質(zhì)細胞合成GFAP增多，這種神經(jīng)膠質(zhì)活躍的過程是星形膠質(zhì)細胞對腦損傷的一種特有反應(yīng)，出現(xiàn)星形膠質(zhì)細胞增殖，細胞體和細胞核過度腫大，并且這種反應(yīng)可持續(xù)存在，GFAP作為重要的標志，星形膠質(zhì)細胞增殖的程度和腦組織損傷的程度可用GFAP的表達進行評定，有研究顯示PD患者腦內(nèi)GFAP含量明顯增高，治療后其含量下降，臨床癥狀減輕。目前

4、對帕金森病的治療仍以藥物治療為主，可以減輕大部分患者的臨床癥狀，但長期使用會出現(xiàn)較多的副作用，例如療效減低、癥狀出現(xiàn)波動以及運動和精神障礙等等，并且不能阻止或延緩多巴胺能神經(jīng)元的進行性喪失。因此，人們一直在尋找能夠延緩、阻止甚至逆轉(zhuǎn)神經(jīng)變性的藥物，保護神經(jīng)元不受損失。康復(fù)訓(xùn)練在腦損傷患者治療中所起的肯定作用，給PD治療提供了新的啟示和一線希望。本實驗研究康復(fù)訓(xùn)練對帕金森病小鼠行為學(xué)、腦紋狀體多巴胺及其代謝產(chǎn)物3,4-二羥苯乙酸(3，4-

5、dihydroxyphenylacetic acid，DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid，HVA)的含量、腦黑質(zhì)酪氨酸羥化酶及膠質(zhì)纖維酸性蛋白的影響，探討康復(fù)訓(xùn)練提高帕金森病小鼠運動功能的可能性及其機制。
　　 方法：
　　 1．標本制備：健康C57BL/6J雄性小鼠96只隨機分為正常組，假手術(shù)組，模型組和康復(fù)組，正常組不做任何處理，假手術(shù)組腹腔注射生理鹽水后不做任何處理；模型組和康復(fù)組均腹腔注射

6、1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(1-Methy1-4-Pheny1-1,2,3,6-Tetrahydropyridine Hrdrochloride,MPTP)制備PD小鼠，造模成功后模型組不做任何處理，康復(fù)組每日行康復(fù)訓(xùn)練，共訓(xùn)練4周。
　　 2．在康復(fù)訓(xùn)練0周，1周，2周及4周后分別觀察4組小鼠的行為學(xué)改變，并同時切取不同時間，不同組小鼠腦組織、切片，用高效液相色譜法檢測小鼠腦組織內(nèi)DA及其代謝產(chǎn)物含量，用免疫

7、組織化學(xué)方法檢測GFAP和TH的表達變化，并進行數(shù)據(jù)采集和分析。
　　 結(jié)果：
　　 1．康復(fù)訓(xùn)練后0周，模型組和康復(fù)組小鼠肢體功能明顯減退，康復(fù)訓(xùn)練2周后，康復(fù)組小鼠肢體功能明顯提高，模型組小鼠功能提高不明顯，兩組相比差異有顯著性，康復(fù)訓(xùn)練4周后，模型組小鼠肢體功能仍提高不明顯，兩組相比差異有顯著性。模型組小鼠在康復(fù)訓(xùn)練2周后與康復(fù)訓(xùn)練4周后相比，肢體功能差異無顯著性。
　　 2．康復(fù)訓(xùn)練后0周，模型組和康復(fù)組

8、小鼠紋狀體內(nèi)DA及其代謝產(chǎn)物含量明顯減少，與正常組和假手術(shù)組相比有統(tǒng)計學(xué)差異；康復(fù)訓(xùn)練2周后，模型組DA及其代謝產(chǎn)物含量無明顯變化，康復(fù)組DA及其代謝產(chǎn)物含量明顯提高，兩組相比有統(tǒng)計學(xué)差異；康復(fù)訓(xùn)練4周后，模型組DA及其代謝產(chǎn)物含量仍無明顯提高，與康復(fù)組相比有統(tǒng)計學(xué)差異。模型組小鼠在康復(fù)訓(xùn)練2周后與康復(fù)訓(xùn)練4周后相比，腦內(nèi)DA及其代謝產(chǎn)物含量差異無顯著性。
　　 3．免疫組織化學(xué)染色顯示未進行康復(fù)訓(xùn)練時，模型組和康復(fù)組小鼠TH陽

9、性細胞數(shù)明顯減少，與正常組或假手術(shù)組相比有統(tǒng)計學(xué)差異；康復(fù)訓(xùn)練2周后，康復(fù)組TH陽性細胞數(shù)明顯增多，而模型組TH細胞數(shù)無明顯增多，兩組相比有統(tǒng)計學(xué)差異；康復(fù)訓(xùn)練后4周，模型組TH陽性細胞數(shù)增多不明顯，與康復(fù)組相比差異有顯著性。模型組小鼠在康復(fù)訓(xùn)練2周后與康復(fù)訓(xùn)練4周后相比，TH陽性細胞數(shù)差異無顯著性。
　　 4．康復(fù)訓(xùn)練后0周，正常組及假手術(shù)組小鼠可見少量的GFAP陽性細胞，模型組及康復(fù)組GFAP數(shù)均明顯增多，與正常組及假手術(shù)組

10、相比差異有顯著性；模型組與康復(fù)組無顯著性差異?？祻?fù)訓(xùn)練后4周，模型組小鼠GFAP陽性細胞數(shù)減少不明顯，康復(fù)組GFAP陽性細胞數(shù)減少明顯，與模型組相比差異有顯著性。模型組小鼠在康復(fù)訓(xùn)練2周后與康復(fù)訓(xùn)練4周后相比，GFAP陽性細胞數(shù)差異無顯著性。
　　 結(jié)論：
　　 1．小鼠腹腔注射MPTP后出現(xiàn)帕金森病行為學(xué)特征。康復(fù)訓(xùn)練可提高PD小鼠的肢體運動功能。
　　 2．康復(fù)訓(xùn)練可通過提高腦內(nèi)多巴胺及其代謝產(chǎn)物含量改善PD