肺癌診斷試劑與分子影像造影劑的研制.pdf

1、目的：對(duì)于肺癌早期篩查和診斷，利用特異性與靈敏性較高的NSE、CYFRA21-1等肺癌相關(guān)標(biāo)記物，采用斑點(diǎn)免疫雜交和混合ELISA技術(shù)研制肺癌體外聯(lián)合診斷 ELISA試劑盒；對(duì)于中晚期肺癌轉(zhuǎn)移與預(yù)后的判斷，利用本實(shí)驗(yàn)前期篩選獲得的肺癌靶向結(jié)合多肽，經(jīng)過化學(xué)修飾與結(jié)構(gòu)優(yōu)化，標(biāo)記核素[18F]，研制出新型肺癌體內(nèi)診斷分子顯像劑，為中晚期肺癌的臨床預(yù)后轉(zhuǎn)歸、病程分子等判斷、分子分型和個(gè)性化治療提供更為準(zhǔn)確的技術(shù)手段。
　　方法：利用斑點(diǎn)

2、免疫雜交原理，在硝酸纖維素膜上篩查肺癌相關(guān)的多種相關(guān)標(biāo)記物，發(fā)現(xiàn)標(biāo)記物中NSE、CYFRA21-1兩兩組合對(duì)肺癌的診斷率最高，將NSE、CYFRA21-1兩種抗原的抗體按一定比例組合包被到酶標(biāo)板的板底，考察包被液、包被時(shí)間、包被溫度、包被保護(hù)液等因素，已達(dá)到試劑盒中酶標(biāo)板的高效、穩(wěn)定，同時(shí)考察檢測抗體保護(hù)液的配方組成，顯色液的反應(yīng)等因素使整個(gè)雙顯色ELISA試劑盒更加穩(wěn)定，確診率更高。
　　通過化學(xué)方法合成多肽修飾化合物（ZP）并

3、標(biāo)記異硫氰酸（FITC）熒光素。以不同肺癌、肺部疾病和肺部正常組織芯片鑒定多肽修飾化合物對(duì)肺癌的診斷陽性率情況；將ZP經(jīng)尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內(nèi)，取心、肝、脾、肺、腎、腦、腫瘤組織，冰凍切片，觀察ZP在不同組織中的熒光強(qiáng)度，確定其在體內(nèi)的靶向性分布；用核素[18F]標(biāo)記ZP，制備化合物[18F]-ZP，將化合物注入荷瘤裸鼠體內(nèi)，進(jìn)行PET/CT全身成像，考察[18F]-ZP在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布、代謝情況。
　　結(jié)果：NSE、CYF

4、RA21-1肺癌雙顯色ELISA診斷試劑盒4℃放置有效期為6個(gè)月。試劑盒CYFRA21-1灰區(qū)吸光度（OD）值范圍就是0至0.38478之間，遇灰區(qū)患者是為可疑要復(fù)查。試劑盒CYFRA21-1正常值范圍0至24.08ng/mL；試劑盒NSE灰區(qū)吸光度（OD）值范圍就是0至0.4145之間，遇灰區(qū)患者是為可疑要復(fù)查。正常值范圍0至9.8ng/mL。試劑盒靈敏性83.8％（129/154）、特異性53.8%（57/106）、準(zhǔn)確性71.5%

5、（186/260）。
　　作為分子影像造影劑的化合物ZP合成產(chǎn)率高、純度高；ZP-FITC肺癌組織芯片檢測ZP的靈敏性50%（35/70）、特異性60%（3/5）、準(zhǔn)確性50.7%（38/75），ZP-FITC裸鼠體內(nèi)在肺鱗癌和肺腺癌組織分布相比于其他組織明顯偏高。核素[18F]標(biāo)記 ZP過程可靠、技術(shù)成熟，將化合物注入荷瘤裸鼠體內(nèi)，進(jìn)行 PET/CT全身成像，當(dāng)注射后，腫瘤組織顯像最為明顯，將為肺癌的分子影像診斷和分子分型提供可