嬰幼兒人巨細(xì)胞病毒臨床分離株糖蛋白H基因多態(tài)性研究.pdf

1、目的：
　　本文主要研究嬰幼兒人巨細(xì)胞病毒(HCMV)臨床分離株包膜糖蛋白H(gH)的基因多態(tài)性,分析該基因不同型別在HCMV感染引起的不同疾病中的分布情況及其與不同疾病之間的關(guān)系,為進(jìn)一步了解HCMV致病機(jī)理及亞單位疫苗研究提供參考。
　　方法：
　　1、HCMV臨床分離株的分離培養(yǎng):取患兒尿液標(biāo)本接種于人胚肺細(xì)胞孵育8-12小時(shí)后換液,連續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞發(fā)生病變(CPE),再取上清液接種于新鮮人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)至CP

2、E達(dá)80％-90%病變時(shí)收集和保存。
　　2、gH基因分型:應(yīng)用巢式PCR擴(kuò)增HCMV臨床分離株和AD169株gH基因,核苷酸純化試劑盒純化PCR產(chǎn)物,用限制性內(nèi)切酶HhaI酶切,酶切片段經(jīng)12%聚丙烯酰胺凝膠電泳,銀染顯色,比對(duì)分型。
　　3、gH基因序列多態(tài)性分析:將部分PCR擴(kuò)增陽(yáng)性的產(chǎn)物純化后測(cè)序,與AD169株、Towne株序列進(jìn)行比對(duì),用DNAsis軟件分析。
　　結(jié)果：
　　1、HCMV臨床分離株的

3、分離培養(yǎng):共選擇105例樣本進(jìn)行分離,最終CPE陽(yáng)性病毒株50株,分離成功率為47.6%。
　　2、gH基因分型:經(jīng)巢式PCR擴(kuò)增,50例臨床分離株中有34例(14例為嬰兒肝炎綜合征,12例為無(wú)黃疸型肝炎,5例為肺炎,1例為先天性CMV感染)gH基因陽(yáng)性,陽(yáng)性率為68%;分型顯示,gH1型21株,占61.8%;gH2型13株,占38.2%;未見(jiàn)混合型和發(fā)現(xiàn)新的型別,gH基因型別在不同疾病間呈散在分布(X2=0.336,P>0.05

4、)。
　　3、gH基因序列多態(tài)性分析:隨機(jī)挑選15株gH基因陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)序分型并與AD169和Towne株序列比對(duì),gH1型有10株,gH2型有5株,其結(jié)果與酶切分型結(jié)果完全符合。其中所選的第2、4、5、6、7、9、10、11臨床株堿基序列相同,編碼的氨基酸也相同,同源性為100%,與AD169株核苷酸相似性、氨基酸一致性分別為97.2%、95.52%,同源性較高;第8、12、14臨床株堿基序列、氨基酸相同,相互間同源性也高達(dá)100

5、%,與TOWNE株核苷酸相似性為99.53%,氨基酸一致性為95.52%。gH序列變異以核苷酸替換為主,也可見(jiàn)插入和缺失突變;與AD169株相比,核苷酸相似性為89.1%～97.2%,氨基酸一致性為74.24%～95.52%;與TOWNE株相比核苷酸相似性為91.12%～99.53%,氨基酸一致性為80.06%～98.5%。DNA變異位點(diǎn)分布比較散在;氨基酸變異相對(duì)集中,與AD169相比,氨基酸變異集中在41～87位點(diǎn),與TOWNE株比