FGF-1在TA2小鼠乳腺中的表達(dá)變化及其對(duì)自發(fā)性乳腺癌發(fā)生的作用.pdf

1、目的： 通過比較正常成年未妊娠、不同孕次妊娠及產(chǎn)后不同天數(shù)（孕1次至孕4次）TA2小鼠的血清中E2（雌二醇）和P（孕酮）的濃度變化及乳腺組織中FGF-1的表達(dá)情況，探討血清中E2和P的濃度與乳腺FGF-1表達(dá)水平的相關(guān)性，分析孕次數(shù)與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系；并通過檢測(cè)外源性E2和P對(duì)去勢(shì)小鼠乳腺中FGF-1表達(dá)的影響進(jìn)一步驗(yàn)證E2和P與乳腺FGF-1表達(dá)水平的關(guān)系；最后通過比較TA2小鼠的正常乳腺、癌前病變?nèi)橄俸腿橄侔┙M織中FGF-1

2、和FGFR1的表達(dá)差異，探討FGF-1和FGFR1在TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌發(fā)生中作用。 方法： 1．收集首次妊娠分娩前后不同時(shí)間點(diǎn)TA2小鼠的乳腺，利用Real-time PCR和免疫組化方法檢測(cè)FGF-1的表達(dá)；結(jié)合小鼠血清中E2和P的濃度測(cè)定結(jié)果，探討在妊娠及分娩后不同時(shí)期血清E2和P濃度與FGF-1表達(dá)水平之間的相關(guān)性。 2．制作20只去勢(shì)TA2小鼠模型（摘除卵巢），隨機(jī)分為雌激素組、孕酮組、雌孕激素聯(lián)合給

3、藥組和對(duì)照組，每組5只。給藥劑量為去勢(shì)小鼠血清E2和P水平達(dá)到妊娠10-15天左右體內(nèi)激素水平。給藥30天后檢測(cè)各組小鼠乳腺組織中FGF-1的表達(dá)，驗(yàn)證E2和P對(duì)FGF-1表達(dá)的影響。 3．收集8月齡正常未妊娠TA2小鼠、第一次妊娠到第四次妊娠孕20天小鼠及第一次妊娠到第三次妊娠產(chǎn)后42天小鼠各5只，利用HE和卡紅染色觀察各組小鼠乳腺形態(tài)變化；利用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定各小鼠血清中E2和P濃度；利用Real-time PCR和免疫組化

4、方法測(cè)定各小鼠乳腺中FGF-1、cyclinD1的表達(dá)。 4．收集17例TA2自發(fā)性乳腺癌小鼠的癌組織和癌前病變組織、7只正常TA2成年雌鼠的乳腺組織，利用Real-time PCR和免疫組化方法比較各組織中FGF-1、FGFR1、cyclinD1的表達(dá)差異。 結(jié)果： 1．E2和P隨著妊娠天數(shù)的增加而增加，孕15天兩者達(dá)到最高，然后E2和P均下降，哺乳結(jié)束時(shí)下降到妊娠前水平；孕5天時(shí)FGF-1表達(dá)水平較高，爾后下

5、降，至孕10天時(shí)又開始上升，至孕15天時(shí)達(dá)到最高，此后呈下降趨勢(shì)，直至哺乳結(jié)束時(shí)降至未妊娠水平。從雌孕激素和FGF-1的變化趨勢(shì)可以得出，除孕5天外，其它各時(shí)間點(diǎn)，雌孕激素濃度變化和FGF-1表達(dá)水平變化趨勢(shì)相似。 2．外源性E2和P與去勢(shì)小鼠乳腺中FGF-1表達(dá)的關(guān)系E2和P均可促進(jìn)乳腺FGF-1mRNA和蛋白的表達(dá)，其中聯(lián)合給藥組乳腺FGF-1表達(dá)水平最高、E2組次之、然后是P組、對(duì)照組最低，三個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異均具有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0．05）；而且聯(lián)合給藥組小鼠乳腺中FGF-1的表達(dá)均顯著高于雌二醇和孕酮單獨(dú)給藥組（均P<0．01）；但E2組和P組間無顯著差異（P>0．05）。 3．隨著妊娠次數(shù)的增加，孕20天的小鼠乳腺組織形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，逐漸出現(xiàn)明顯的增生現(xiàn)象，表現(xiàn)為排布緊密的上皮細(xì)胞團(tuán)；TA2小鼠血清中E2和P濃度也增加，尤其是E2，第四次妊娠時(shí)血清E2濃度較第一、二次妊娠有顯著的增加（均P<0．01），此外，第四次妊娠時(shí)血清P濃度

7、也明顯高于第一次妊娠（P<0．05）；對(duì)應(yīng)的乳腺組織內(nèi)FGF-1和cyclinD1表達(dá)水平呈相同變化趨勢(shì)。 4．妊娠次數(shù)與乳腺?gòu)?fù)舊的關(guān)系孕1次或2次的已復(fù)舊乳腺（產(chǎn)后42天）與正常乳腺形態(tài)學(xué)無明顯改變，孕3次時(shí)復(fù)舊的乳腺形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，可出現(xiàn)局部復(fù)舊不全或增殖，而8月齡處女鼠乳腺均無明顯增殖；產(chǎn)后42天小鼠血清中E2和P濃度隨著產(chǎn)次的增加而升高，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P>0．05），8月齡處女鼠血清E2和P濃度與1產(chǎn)后小鼠

8、相近；孕3次復(fù)舊乳腺中FGF-1和cyclinD1的表達(dá)水平明顯高于孕1次復(fù)舊乳腺和8月齡處女鼠乳腺（均P<0．05）。 5．TA2自發(fā)性乳腺癌小鼠的癌前病變組織和癌組織中FGF-1、FGFR1和cyclinD1表達(dá)均高于正常乳腺（均P<0．05）；cyclinD1在瘤組織中的表達(dá)高于癌前病變（P<0．05）；而在癌前病變組織中FGFR1的表達(dá)高于乳腺癌組織（P<0．05）。 結(jié)論： 1．E2和P均可促進(jìn)乳腺組織

9、FGF-1表達(dá)，而且兩者間可能存在協(xié)同作用。 2．TA2小鼠血清中E2和P濃度與乳腺組織中FGF-1表達(dá)水平之間存在相似的變化趨勢(shì)，妊娠時(shí)較高水平的E2和P可能通過上調(diào)乳腺組織中FGF-1的表達(dá)促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞的增殖。 3．乳腺增殖程度和復(fù)舊不全現(xiàn)象隨妊娠次數(shù)增多逐漸加重，可能與E2和P上調(diào)FGF-1后促進(jìn)cyclinD1表達(dá)有關(guān)。因此，妊娠次數(shù)的增加可能促進(jìn)TA2小鼠自發(fā)性乳腺癌的發(fā)生。 4．在乳腺癌發(fā)生的早期