黃芩苷粗品化學(xué)成分的研究.pdf

1、黃芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)、抗氧化、抗腫瘤等作用。在含黃芩中成藥及制劑中，或以黃芩原藥入藥，或以黃芩提取物入藥，其中的有效部位為黃芩總黃酮，主要有效成分為黃芩苷。黃芩的眾多制劑中，具有創(chuàng)造性、應(yīng)用廣泛、療效確實(shí)、影響巨大的是注射用雙黃連(凍干)，也就是俗稱(chēng)的“雙黃連粉針劑”。注射用雙黃連(凍干)是世界上第一個(gè)工業(yè)化大生產(chǎn)的中藥粉針劑，于19

2、90年上市銷(xiāo)售。注射用雙黃連(凍干)徹底解決了水針劑無(wú)法解決的問(wèn)題，如藥品的穩(wěn)定性和不溶性微粒，全面提高了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其制備方法獲國(guó)家專(zhuān)利(中國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)CN1039725A)，1992年被國(guó)家中醫(yī)藥管理局指定為全國(guó)中醫(yī)院首批急診必備中成藥，并被收入到2005年版《中國(guó)藥典》。 雖然注射用雙黃連(凍干)獲得殊榮無(wú)數(shù)，療效也備受肯定，但因?yàn)樗鼘儆诎踩砸髽O高的靜脈用藥制劑，在應(yīng)用中也發(fā)現(xiàn)存在一些不良反應(yīng)，如過(guò)敏等，個(gè)別病例較嚴(yán)重。

3、因此如何降低不良反應(yīng)發(fā)生率、提高安全性，非常值得認(rèn)真研究。 1。課題來(lái)源、目的和意義： 本課題為注射用雙黃連(凍干)發(fā)明人羅佳波教授系列課題中的一部分，主要從物質(zhì)基礎(chǔ)角度研究注射用雙黃連(凍干)不良反應(yīng)產(chǎn)生的原因，弄清注射用雙黃連(凍干)重要處方組成--黃芩苷粗品中所含的化學(xué)成分，尤其關(guān)注黃芩苷以外的化學(xué)成分，以期為進(jìn)一步完善注射用雙黃連(凍干)的處方和制備工藝、提高藥效、降低不良反應(yīng)提供依據(jù)和幫助，使年產(chǎn)值達(dá)10億元的

4、名牌藥品繼續(xù)創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，同時(shí)也能夠?yàn)閺V大患者祛除病痛、恢復(fù)健康做出更大的貢獻(xiàn)。 經(jīng)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)檢索，有關(guān)黃芩的有效成分提取、分離、分析及含量測(cè)定的研究很多，但是對(duì)于注射用雙黃連(凍干)中的有效成分研究較少，而對(duì)于注射用雙黃連(凍干)中主要處方組成的黃芩苷粗品的成分研究尚未發(fā)現(xiàn)，因此本課題的研究具有創(chuàng)新性。 2。研究方法和內(nèi)容： 2.1黃芩苷粗品的提取提取方法 參照中國(guó)藥典(2005版)“注射用雙黃連

5、(凍干)”項(xiàng)下黃芩提取方法進(jìn)行，基本工藝為水提酸沉，且酸沉次數(shù)為3次，以便達(dá)到較好的純化效果，使粗品中黃芩苷的含量更高，而雜質(zhì)更少。因藥典工藝較為籠統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)中對(duì)個(gè)別環(huán)節(jié)進(jìn)行了明確和優(yōu)化。 2.2黃芩苷粗品中黃芩苷的分析 在參考大量文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)和摸索，建立了黃芩苷的高效液相色譜測(cè)定方法，確定了測(cè)定條件為：色譜柱采用AgilentZORBAXSB-C18(5μm，4.6mm×250mm)柱；流動(dòng)相為甲醇一水一冰醋酸

6、(48:52:0.2)；檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm；流速為0.8ml·min-1；柱溫27℃。在上述條件下對(duì)4批黃芩苷粗品進(jìn)行了測(cè)定。 另外，還測(cè)定了黃芩苷粗品和黃芩苷對(duì)照品的紫外吸收光譜，兩者在216nm、279nm處有相同的吸收峰，且在312nm處也有相似的吸收峰，紫外吸收光譜圖高度重合。 2.3黃芩苷粗品中其他黃酮類(lèi)成分的分析 同樣在參考文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，經(jīng)過(guò)多次的摸索，建立了黃芩苷粗品中4種黃酮類(lèi)成分的高效液相色譜測(cè)

7、定方法，確定了苷和苷元的測(cè)定條件：色譜柱采用AgilentZORBAXSB-C18(5μm，4.6mm×250mm)柱；流動(dòng)相：苷類(lèi)成分(黃芩苷和漢黃芩苷)采用甲醇一水一冰醋酸(50:50:0.2)，苷元類(lèi)成分(黃芩素和漢黃芩素)采用甲醇一水一冰醋酸(61:39:0.2)；檢測(cè)波長(zhǎng)275nm；流速0.8ml·min-1；柱溫27℃。在上述條件下對(duì)4批黃芩苷粗品進(jìn)行了測(cè)定。 2.4黃芩苷的分離 根據(jù)黃芩苷的理化性質(zhì)，設(shè)計(jì)了

8、分離流程，采用沉淀法和結(jié)晶法相結(jié)合，對(duì)黃芩苷粗品中的黃芩苷進(jìn)行了分離，并得到了黃芩苷單體。 2.5其他成分的分離 根據(jù)黃芩苷粗品中所含成分的性質(zhì)，研究出獨(dú)特的分離流程，巧妙地利用聚酰胺柱色譜和硅膠柱色譜，對(duì)黃芩苷粗品進(jìn)行了分離，得到了黃芩素單體。另外，分離出的餾分Ia固體物較少，無(wú)法進(jìn)一步純化得到結(jié)晶，經(jīng)薄層色譜分析所含成分為漢黃芩素。 3結(jié)果： 3.1黃芩苷粗品的提取 共提取了4批黃芩苷粗品，均

9、為淡黃色粉末，平均收率為3.53％。另外對(duì)藥典提取工藝中二次酸沉“加適量水”進(jìn)行了探討，明確為按原料藥：水=1:1的比例加入；在第三次保溫后的過(guò)濾環(huán)節(jié)，宜將待濾液保溫(50℃即可)，以防其遇冷形成膠狀物。 3.2黃芩苷粗品中主要成分的分析 以高效液相色譜法測(cè)定的黃芩苷粗品中黃芩苷含量平均為94.19％，回歸方程：Y=3495.1X-62.156，r=0.9999(P<0.001)；精密度實(shí)驗(yàn)峰面積積分值的RSD=0.69

10、％(n=6)；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD=0.95％(n=6)；平均加樣回收率為100.54％，RSD=1.18％(n=5)。 以高效液相色譜法測(cè)定的黃芩苷粗品中黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素的平均含量分別為：3.44％、0.35％、0.06％；回歸方程分別為：Y=2718.6X-25.451，r=0.9995(P<0.001)；Y=3992.3X-4.9443，r=0.9998(P<0.001)：Y=4083.6X-3.7952，r=0.9

11、993(P<0.001)；精密度實(shí)驗(yàn)峰面積積分值的RSD分別為1.55％、1.39％和1.88％(n=6)；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD分別為1.41％、1.59％、1.97％(n=6)；平均加樣回收率分別為100.62％、102.64％、98.00％，RSD為1.67％、1.73％、2.00％(n=5)。 3.3黃芩苷粗品中主要成分的分離 分離得到的黃色針狀結(jié)晶鑒定如下：mp.222～224℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽(yáng)性；UVλMeOH

12、maxnm:244、279、312；經(jīng)薄層色譜(TLC)三種展開(kāi)劑展開(kāi)，均為單一斑點(diǎn)，且Rf值與黃芩苷對(duì)照品相同；高效液相色譜(HPLC)中與黃芩苷對(duì)照品保留時(shí)間同為11.5min。 分離得到的亮黃色針狀結(jié)晶鑒定如下：mp.268～270℃，鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈櫻紅色，Molish反應(yīng)陰性；UVλMeOHmaxnm:237、276、330；經(jīng)TLC三種展開(kāi)劑展開(kāi)，均為單一斑點(diǎn)，且Rf值與黃芩素對(duì)照品相同；高效液相色譜中與黃芩素對(duì)照品

13、保留時(shí)間同為12.7min。 分離得到的黃色粉末(餾分Ia)質(zhì)量較少，未能得到結(jié)晶，經(jīng)TLC和HPLC分析所含成分為漢黃芩素。 4結(jié)論： 經(jīng)過(guò)初步分析，在注射用雙黃連(凍干)處方組成部分黃芩苷粗品中，主要含有黃芩苷，含量平均94％，另含有黃芩素、漢黃芩苷、漢黃芩素，平均含量分別為3.44％、0.35％、0.06％，以上4種黃酮類(lèi)化合物合計(jì)約為98％，尚含約2％左右的未知成分，有待進(jìn)一步分析研究；而注射用雙黃連(凍

14、干)的不良反應(yīng)與上述成分是否相關(guān)也有待進(jìn)一步探討。 在黃芩苷粗品的成分分析中，建立了高效、快速、準(zhǔn)確的HPLC分析方法，不僅初步明確了黃芩苷粗品中的主要成分，還為黃芩苷粗品以及注射用雙黃連(凍干)今后生產(chǎn)中的質(zhì)量控制提供了良好的手段。在此基礎(chǔ)上，研究、建立黃芩苷粗品的指紋圖譜，從而更精確地控制其質(zhì)量，提高藥品的安全性，則是今后有必要開(kāi)展的一項(xiàng)工作將傳統(tǒng)的聚酰胺柱色譜和硅膠柱色譜結(jié)合在一起，創(chuàng)建了獨(dú)特的分離方法，經(jīng)過(guò)對(duì)黃芩苷粗品的