中藥海馬的品種與DNA條形碼鑒定研究.pdf

1、中藥海馬（Hippocampus）始載于《本草經(jīng)集注》，是我國(guó)傳統(tǒng)的名貴中藥。中國(guó)藥典規(guī)定海馬是海龍科海馬屬的5種動(dòng)物，均被列入CITES附錄II。歷代本草關(guān)于海馬的記載均不盡相同，而經(jīng)典的中藥材鑒定方法主要依據(jù)于藥材形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，同時(shí)海馬藥材經(jīng)過(guò)干燥等加工后其形態(tài)與原動(dòng)物形態(tài)有一定的差別，形態(tài)鑒定難以確保準(zhǔn)確度，因此亟需建立一種快速準(zhǔn)確的鑒定方法。DNA條形碼技術(shù)作為分子鑒定的新技術(shù)，以高效、準(zhǔn)確和方便的優(yōu)勢(shì)被迅速用于中藥材的鑒定

2、，對(duì)物種進(jìn)行鑒定時(shí)不受物種生長(zhǎng)階段和外觀形態(tài)的影響，這有效的改善了中藥材形態(tài)學(xué)在鑒定方面的不足。
　　因此本研究在對(duì)中藥海馬進(jìn)行本草、形態(tài)學(xué)研究的基礎(chǔ)上建立了基于DNA條形碼技術(shù)的分子鑒定新方法，并補(bǔ)充了海馬藥材的形態(tài)鑒定，為海馬的準(zhǔn)確應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
　　對(duì)海馬本草考證表明：海馬最早收載于《本草經(jīng)集注》，古今文獻(xiàn)關(guān)于中藥海馬的形態(tài)描述均較少，不能為海馬的直接形態(tài)鑒定提供科學(xué)依據(jù)。
　　通過(guò)對(duì)成都荷花池、安徽亳州和河北

3、安國(guó)三大中藥材專業(yè)市場(chǎng)流通的海馬藥材進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明：1）市售海馬藥材中非藥典種銷售比例較大，共有10個(gè)市售種，藥典收載的正品種有5個(gè)；2）摻偽摻重現(xiàn)象嚴(yán)重。其中昆士蘭海馬H.queenslandicus摻重比高達(dá)46.58％；3）銷售時(shí)沒(méi)有嚴(yán)格規(guī)范的分類銷售標(biāo)準(zhǔn)，多以海馬外形完整、平整少刺、個(gè)大、表面干凈為質(zhì)優(yōu)。在市場(chǎng)調(diào)查的基礎(chǔ)上，選取市場(chǎng)調(diào)查所得海馬藥材為研究對(duì)象，初步建立了海馬的圖文檢索表，為該藥材的快速鑒定奠定基礎(chǔ)。
　

4、　對(duì)海馬的 DNA條形碼研究表明：中藥海馬的形態(tài)學(xué)研究為15個(gè)商品種，DNA條形碼研究結(jié)果確定并建議更正為9個(gè)種，其中刺海馬（H.histris）的研究尚在進(jìn)行中，二者之間明顯不同的研究結(jié)果表明了DNA條形碼在海馬藥材鑒定上的必要性和重要性。9個(gè)市售海馬商品藥材基原種的COI基因堿基含量分析顯示：A+T平均含量（59.4%）遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 G+C的平均含量（40.6%），符合脊椎動(dòng)物線粒體DNA的特點(diǎn)。遺傳距離分析結(jié)果顯示，9個(gè)市售海馬商品藥

5、材基原種的平均種間遺傳距離（0.0853），遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于種內(nèi)平均遺傳距離（0.0033）。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)顯示9個(gè)市售海馬商品藥材基原種形成9個(gè)單系，同一商品種的不同個(gè)體嚴(yán)格聚在一起形成單系，且節(jié)點(diǎn)處支持率極高，自檢舉值均為99~100%，表明DNA條形碼適用于市售海馬商品藥材基原種的鑒定。為了驗(yàn)證DNA條形碼的可行性，對(duì)市售海馬藥材進(jìn)行了隨機(jī)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明DNA條形碼能夠準(zhǔn)確、快速的對(duì)隨機(jī)樣品進(jìn)行鑒定。上述研究說(shuō)明利用DNA條形碼技術(shù)對(duì)海馬