基于COI條形碼序列的中藥蛇膽DNA分子鑒定研究.pdf

1、中藥蛇膽是常用貴重藥材，具有清熱解毒、化痰鎮(zhèn)痙的功效?！吨袊幍洹罚?010年版）中收載以蛇膽為主要原料的制劑有20余種，但由于其蛇膽藥材來源復(fù)雜和鑒定困難卻缺乏相應(yīng)的藥材標(biāo)準(zhǔn)。近年來DNA條形碼鑒定是中藥鑒定領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，CO I序列已成功用于豬膽粉、金錢白花蛇等動物類藥材的鑒定。為了建立中藥蛇膽藥材的質(zhì)量控制方法，本文探討了DNA條形碼鑒定中藥蛇膽的可行性。
　　目的：建立一種蛇膽的DNA分子鑒定方法，并考察其實(shí)際應(yīng)用的可行

2、性。
　　方法：分別于四省采集24種共226個蛇膽樣品，使用CTAB法對蛇膽樣品進(jìn)行提取。利用自行設(shè)計的通用引物SNCOI2擴(kuò)增所有樣品的CO I序列并進(jìn)行雙向測序，拼接后去掉引物區(qū)獲得所需序列。在GenBank中對序列進(jìn)行Blast相似性鑒定，驗(yàn)證測序結(jié)果和基源物種是否一致。然后利用上述方法對124個商品蛇膽進(jìn)行DNA提取和PCR擴(kuò)增，所有測序成功的樣品均經(jīng)Blast鑒定物種來源。
　　結(jié)果：226個樣品蛇膽均能提取出足量

3、DNA，成功擴(kuò)增并獲得相應(yīng)CO I序列。利用MEGA5.0軟件對序列進(jìn)行處理和遺傳差異分析，序列長度一致為658bp，經(jīng)Blast相似度查詢，除頸棱蛇和斜鱗蛇Genbank中暫無收錄外，其余22種蛇類和已有的同種序列相似度在96％以上。24種蛇類的平均種內(nèi)遺傳距離為0～0.0295，遠(yuǎn)小于平均種間遺傳距離0.1014～0.2691，具有顯著的barcoding gap。而商品蛇膽DNA發(fā)生降解，最后124個商品蛇膽共有43個成功獲得CO