2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、膀胱癌是第二常見的泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤。隨著年齡的增長,男性和女性的發(fā)病率逐漸增加。男性發(fā)病率約為女性的三倍。在美國,2012年約50,000男性和17,000名女性患膀胱癌。對香煙及工作環(huán)境致癌物的過度暴露或泌尿系統(tǒng)感染可能引起男性高患病率。然而,即使在缺乏這些危險因素的情況下,與性別有關的發(fā)病率的差異依然存在。因此,男女患者間的性激素及其受體的差異可能是膀胱癌發(fā)生率性別差異的潛在因素,然而有關此方面的證據(jù)仍較少。本研究分為四個部分:

2、
   第一部分:雌激素受體α(ERα)抑制膀胱癌細胞侵襲。
   目的:探討ERα與膀胱癌細胞侵襲的關系。
   方法:首先穩(wěn)定轉染ERα或空載體質粒(vector)進入膀胱癌細胞。嘌呤霉素篩選5天后,免疫熒光測轉染效率。并收集蛋白,Western Blot進一步證實轉染效率。同時利用RNA干擾技術,選擇性的沉默人膀胱癌細胞株647v中ERα基因的表達。之后,使用3種ERα陰性膀胱癌細胞株(T24,UMUC3和

3、J82)和一種ERα陽性膀胱癌細胞株(647v)進行Transwell侵襲實驗。三維侵襲實驗進一步驗證這些膀胱癌細胞株的侵襲能力。
   結果:⑴成功建立了穩(wěn)定轉染ERα及shERα的膀胱癌細胞株。⑵采用Transwell系統(tǒng)研究ERα對膀胱癌細胞侵襲的影響。在T24細胞中過表達ERα,抑制癌細胞的侵襲。用另外兩個膀胱癌細胞株UMUC3和J82進行侵襲實驗也得到了類似的結果。另外,降低ERα在647v細胞的表達增加膀胱癌細胞的侵

4、襲。⑶相似的,采用三維侵襲實驗,證明在UMUC3細胞過表達ERα抑制或敲除647v細胞中ERα增強膀胱癌細胞的侵襲。
   結論:細胞侵襲實驗和三維侵襲實驗的結果顯示ERα抑制膀胱癌細胞的侵襲。
   第二部分:ERα敲除鼠模型建立及ERα抑制膀胱癌侵襲。
   目的:建立雌激素受體α基因敲除鼠(ERαKO)模型并體內研究ERα與膀胱癌侵襲的關系
   方法:建立ERαKO鼠需要兩代,我們首先交配ERαf

5、l/fl的雄性鼠與CMV-Cre轉基因雌性鼠,以獲得CMV-Cre/ERαfl/+鼠(F1)。再交配ERαfl/fl雄性鼠與 CMV-Cre/ERαfl/+雌性鼠(F1),得到ERαfl/+(野生型,WT)和CMV-Cre/ERαfl/fl(ERαKO)鼠(F2)。自6周至18周,每日飲水中喂0.05% N-丁基-N2(4-羥丁基)亞硝胺(BBN)以誘導膀胱癌發(fā)生。在28周(雄鼠)和38周(雌鼠)測血尿,30周(雄鼠)和40周(雌鼠)處

6、死鼠并取膀胱進行H&E染色以比較腫瘤的侵襲性。在30周(雄鼠)和40周(雌鼠)觀察小鼠的生存率。運用Kaplan-Meier生存曲線分析兩組間的生存率差異。
   結果:⑴通過交配ERαfl/fl雄性鼠與CMV-Cre/ERαfl/+雌性鼠成功建立ERαKO鼠,基因型分析證實該鼠內ERα基因缺失。⑵喂養(yǎng)0.05%BBN誘導WT鼠和ERαKO鼠發(fā)生膀胱癌。結果表明,相比WT鼠,ERαKO鼠有較嚴重的血尿。更重要的是,取膀胱組織進行

7、H&E染色的組織學檢查顯示,ERαKO小鼠與野生型小鼠相比,更多進展為肌層浸潤性腫瘤。⑶Kaplan-Meier生存曲線顯示,ERαKO小鼠生存率顯著低于野生型小鼠。
   結論:BBN誘導膀胱癌后,相比WT鼠,ERαKO鼠腫瘤具有較高侵襲性且預后較差。
   第三部分:ERα調節(jié)IGF1、MMP2表達抑制膀胱癌侵襲。
   目的:ERα抑制膀胱癌侵襲的機制研究。
   方法:①首先穩(wěn)定轉染ERα或vec

8、tor進入UMUC3膀胱癌細胞,應用qPCR檢測侵襲相關因子在兩組細胞中的表達差異。②應用T24,647v細胞進一步驗證篩選結果。③為研究篩選出的胰島素樣生長因子1(IGF1),基質金屬蛋白酶2(MMP2)表達,10 ng/ml IGF1處理UMUC3 ERα/vector細胞8小時,Western Blot檢測MMP2蛋白表達,Transwell侵襲實驗研究細胞侵襲性。④50μM MMP2特異性抑制劑ARP-100處理647v shE

9、Rα細胞12小時,Transwell侵襲實驗研究細胞侵襲性。⑤免疫組化檢測WT鼠和ERαKO鼠腫瘤中ERα、IGF1和MMP2表達。
   結果:⑴qPCR檢測侵襲相關因子,轉染ERα進入UMUC3膀胱癌細胞降低IGF1和 MMP2表達。⑵在T24細胞中,過表達ERα降低IGF1和MMP2表達;647v細胞中,抑制ERα增強IGF1和MMP2表達。⑶IGF1處理UMUC3 ERα/vector細胞,MMP2表達增高。⑷IGF1處

10、理UMUC3 ERα細胞,逆轉ERα對膀胱癌細胞侵襲的抑制作用。⑸MMP2特異性抑制劑ARP-100處理647v shERα細胞,逆轉shERα對膀胱癌細胞侵襲的促進作用。⑹ERαKO鼠無ERα表達,且相比WT鼠,腫瘤中IGF1和MMP2表達增高。
   結論:ERα通過下調IGF1進而降低MMP2表達抑制膀胱癌的侵襲。
   第四部分:ERα激動劑體外和體內治療膀胱癌。
   目的:研究ERα激動劑在體外和體內

11、的治療效果。
   方法:①體外實驗,10%活性炭/葡聚糖處理的胎牛血清(CD-FBS)培養(yǎng)647v細胞3天,對照組DMSO處理,實驗組10 nM ERα激動劑丙基吡唑三醇(PPT)處理,24小時后進行Transwell侵襲實驗。②體內實驗,B6雌鼠(n=52),自8周至20周,每日飲水中喂0.05%BBN誘導膀胱癌發(fā)生。52只小鼠隨機分為兩組,DMSO處理組及PPT治療組。自32周起,每兩日50μl的DMSO/PPT(210-

12、4M)腹腔注射。治療60天后處死小鼠并取膀胱組織,H&E染色以比較腫瘤的侵襲性。運用Kaplan-Meier生存曲線分析兩組間的生存率差異。
   結果:⑴相比于DMSO組,PPT處理后的647v細胞侵襲性減低。⑵體內實驗得到相同結果:H&E染色的組織學檢查顯示,DMSO處理組比PPT治療組鼠膀胱腫瘤更多進展為肌層浸潤性腫瘤。⑶Kaplan-Meier生存曲線顯示,PPT治療組小鼠生存率較好,但差異無統(tǒng)計學意義。
  

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