Selectin家族基因多態(tài)性與Graves病遺傳相關(guān)性及其功能的研究.pdf

1、Graves病是一種器官特異性自身免疫性疾病，由多種致病因素所致，主要臨床癥狀為典型的高代謝癥群，不同程度的彌漫性甲狀腺腫及多器官損傷。盡管目前對GD的發(fā)病原因還不甚明了，但是目前認(rèn)為該疾病是由環(huán)境因素和遺傳因素復(fù)雜的交互作用所引起的。研究證實(shí)未經(jīng)過治療的GD患者血清中可溶性選擇素水平顯著高于正常對照人群，并且該黏附因子的濃度與疾病活動性有著顯著的相關(guān)性，可能在一定程度上反映了機(jī)體內(nèi)的免疫過程。本研究探討了選擇素基因多態(tài)性是否導(dǎo)致GD發(fā)

2、生發(fā)展并影響了該疾病的臨床過程。主要研究內(nèi)容如下： ⑴選擇了兩個L-selectin基因上的多態(tài)性位點(diǎn)(sup)進(jìn)行病例-對照關(guān)聯(lián)分析。其中一個SNP位點(diǎn)位于L-selectin基因5’非翻譯區(qū)-642位(rs2205849，命名為C-642T)，另二個SNP位于6號外顯子(rs4987310，命名為c.725 C-T)。應(yīng)用限制性酶切片段長度多態(tài)性方法進(jìn)行多態(tài)性的基因性分析(Restriction Fragment Lengt

3、hPolymorphism，RFLP)。結(jié)果顯示L-selectin基因啟動子-642位點(diǎn)TT基因型的頻率在GD患者組顯著高于健康對照人群。[48％vs.36％；TT genotype vs.CT and CCgenotypes, odd radio，1.66(95％CI，1.13-2.44)χ2=6.7271，P=-0.0095；Pc=0.0190]。單倍型分析顯示-642C/c.725T單倍型頻率在GD患者組顯著低于健康對照人群，(

4、χ2=6.7314；P=0.0095；Pc=0.0190)。構(gòu)建L-selectin調(diào)控區(qū)含C-642T多態(tài)的螢光素酶報告基因表達(dá)載體(pGL3-642C和pGL3-642T)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染HeLa和293T細(xì)胞，應(yīng)用螢光素酶試劑盒檢測螢光素酶活性。轉(zhuǎn)染HeLa細(xì)胞后pGL3-642T比pGL3-642C使報告基因熒光素酶表達(dá)增加27％(p=0.0342)；而在293T細(xì)胞pGL3-642T比pGL3-642C使報告基因表達(dá)增加24％(

5、p=0.0433)。因此，我們的研究首次在中國漢族人群中證實(shí)L-selectin基因多態(tài)性和GD發(fā)病之間存在顯著的相關(guān)性，但是和Graves眼病以及GD發(fā)病年齡之間不存在相關(guān)性。 ⑵六個位于E-selectin基因上的標(biāo)簽多態(tài)性位點(diǎn)(tagSNPs)被篩選出來進(jìn)行病例-對照關(guān)聯(lián)分析，分別為rs10800469，rs3917406，rs3917412，rs2179172rs3917419和rs5368。研究結(jié)果顯示，引起氨基酸改變

6、的錯義SNP(rs5368)和GD之間存在顯著的相關(guān)性[allelic P=0.025，odd radio，1.37(95％CI，1.04-1.81)]。但是和GD之間相關(guān)性最強(qiáng)的位點(diǎn)是rs3917412[allelic P=0.014，odd radio，1.43(95％CI，1.07-1.91)]。單倍型分析顯示單倍型ATAACC在GD患者中的頻率顯著高于正常對照[0.253 vs.0.191，P=0.005，odd ratio1.

7、81(95％CI：1.20-2.72)]。單倍型與血清可溶性sE-selectin的關(guān)聯(lián)分析顯示，E-selectin單倍型和血清中可溶性sE-selectin水平之間存在顯著的相關(guān)性(P=0.0438)。因此，我們的研究提示E-selectin基因多態(tài)性和GD的易感性之間存在著相關(guān)性。 ⑶兩個P-selectin基因上的多態(tài)性位點(diǎn)(SNP)進(jìn)行病例-對照關(guān)聯(lián)分析。其中一個SNP位點(diǎn)位于P-selectin基因5’非翻譯區(qū)-21

8、32位(rs1800807，命名為-2，123C/G)，第二個SNP位于7號外顯子(rs6131，G-A)，該SNP同時引起了P-selectin蛋白第331位絲氨酸被替換天門冬酰胺，因此也命名為Ser331Asn。采用多因子將維法(MDR:Multifactor dimensionality reduction)分析基因-基因間交互作用。研究結(jié)果顯示GD組rs1800807位點(diǎn)G等位基因頻率和對照組間無顯著差異(70％vs71％，χ2

9、=0.0828，P=0.7735)：rs6131位點(diǎn)G等位基因頻率分布在GD組和對照組間無顯著差異(77％vs78％，χ2=0.0680 P=0.7943)。rs1800807位點(diǎn)的GG基因型頻率分布在GD組和對照組無顯著差別(50％vs50％，χ2=1.1912，P=0.5490)。rs6131位點(diǎn)的GG基因型頻率分布在兩組間無顯著差異(59％vs61％，χ2=0.2940，P=0.8633)。單倍型分析結(jié)果顯示GD組單倍型的頻率和對