基于金納米粒子標記的生物分析新方法研究.pdf

1、金納米顆粒由于其獨特的物理化學性質(zhì)和良好的生物相容性備受研究者的青睞。近年來,金納米顆粒作為一種優(yōu)異的光學探針廣泛用于生化分析和診斷治療等領域。本論文基于金納米顆粒的高散射特性,以金納米顆粒為標記探針,發(fā)展了免疫分析甲胎蛋白(AFP)和核酸適配體測定凝血酶的新方法,主要工作如下:
　　AFP是一種癌癥標志物,其臨床檢測在肝癌診斷中具有極重要的意義。我們采用磁珠-金納米粒子夾心免疫分析模型,和共振散射光譜檢測方法,建立了AFP免疫分

2、析新方法。首先將兩種抗體分別與磁珠和金納米粒子連接。當抗體修飾的磁珠和金納米粒子加入到含有AFP的樣品中,夾心免疫復合物將會生成。利用磁珠的恒久磁分離性將夾心復合物與未反應的金納米探針簡便分離,用共振散射光譜來測定金納米探針在特定波長下的共振散射光強度,從而間接測定靶目標AFP的濃度。我們優(yōu)化了如抗體修飾比例、磁珠濃度、金納米探針濃度等實驗條件的影響。在優(yōu)化的條件下,夾心反應中游離金納米探針的共振散射光強度與AFP的濃度呈現(xiàn)良好的線性關

3、系。該方法的線性范圍為13.6 pM~436 pM,最低檢測限達13.6 pM。進而,該方法成功地用于健康人和癌癥病人血清中AFP的濃度的測定。同時,該方法與標準方法ELISA實驗結(jié)果進行對照,結(jié)果表明兩種方法基本一致。我們的方法將有望應用于AFP含量測定的臨床診斷,對于癌癥前期診斷治療大有裨益。
　　基于aptamer分子識別原理和單個納米粒子計數(shù)方法,我們發(fā)展了均相分析凝血酶的新方法。我們將兩種能與凝血酶特異性結(jié)合的核酸適配體

4、 aptamer標記到金納米顆粒表面。將金納米粒子修飾的aptamer加入到含有凝血酶的樣品中,aptamer將與凝血酶反應,生成夾心復合物(二聚體甚至多聚體),因而導致溶液中金納米粒子的個數(shù)的減少,單個納米粒子計數(shù)器能夠根據(jù)微區(qū)中光子爆發(fā)數(shù)減少進行測定。我們在本課題組針對單顆粒計數(shù)法的研究的基礎上做了數(shù)據(jù)處理方面的改進使獲得的數(shù)據(jù)更為可靠,并考察了金納米探針修飾比例、凝血酶與aptamer的反應時間、單顆粒計數(shù)法的檢測時間等實驗條件,