噬菌體作為疫苗載體誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子類型的研究.pdf

1、白色念珠菌是一種寄生于健康人體的正常菌群，在機(jī)體的免疫力下降或者正常菌群失調(diào)的情況下，就會(huì)轉(zhuǎn)變成致病菌。免疫抑制劑的應(yīng)用增加了病人對(duì)念珠菌的易感性，使醫(yī)院內(nèi)患者念珠菌感染的發(fā)病率不斷增加。 熱休克蛋白90(Hsp90)是白色念珠菌在侵染機(jī)體過(guò)程中分泌的一種毒性因子，同時(shí)，作為念珠菌的一種免疫優(yōu)勢(shì)抗原，可以誘導(dǎo)感染機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體。Matthews和本實(shí)驗(yàn)室的工作證明，抗Hsp90的抗體是一種保護(hù)性抗體。 本課題組已經(jīng)證

2、明，噬菌體展示的表位能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答。在念珠菌感染過(guò)程中，CD4<'+>T細(xì)胞的分化方向是決定機(jī)體對(duì)念珠菌感染抗性或易感性的重要方面。為了進(jìn)一步研究噬菌體作為表位載體，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生細(xì)胞因子的類型，本研究利用展示有C表位的雜合噬菌體、野生噬菌體和與匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)的化學(xué)合成C表位(KLH-C)，免疫C57BL/6J小鼠，再采用定量ELISA方法，檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中分泌細(xì)胞因子的水平。同時(shí)用RT-PCR

3、方法分析了mRNA水平上細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄，確定了檢測(cè)小鼠體內(nèi)脾中Th1和Th2型細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄。得到的結(jié)果如下： 1．噬菌體作為疫苗載體可以增強(qiáng)免疫鼠脾細(xì)胞Th1型細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄。雜合噬菌體、野生噬菌體和KLH-C免疫小鼠體內(nèi)脾中Th1型細(xì)胞因子，IFN-γ、IL-2和IL-12的轉(zhuǎn)錄水平相似，與TE對(duì)照組比較，差異顯著。IL-10在免疫鼠和對(duì)照鼠間的轉(zhuǎn)錄水平相似。 2．噬菌體作為疫苗載體可以誘導(dǎo)免疫鼠的脾細(xì)胞分泌Th1型

4、細(xì)胞因子。雜合噬菌體免疫小鼠的脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中，Th1型細(xì)胞因子，IFN-γ和IL-12的蛋白分泌水平與TE對(duì)照組比較，具有顯著性差異，與KLH-C免疫小鼠相似。Th2型細(xì)胞因子，IL-10的分泌水平在免疫組和對(duì)照組之間沒(méi)有差異。 因此，噬菌體作為疫苗載體，能夠通過(guò)增強(qiáng)Th1型細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，與傳統(tǒng)的化學(xué)載體KLH相比，具有相似的作用。而且其制備簡(jiǎn)單、省時(shí)省力的優(yōu)點(diǎn)使噬菌體作為表位載體在疫苗研究中具有廣