IL-4-STAT6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中Igε基因轉(zhuǎn)錄抑制分子機(jī)制的初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的: STAT6是STATs家族的一員,可被細(xì)胞因子IL-4特異性激活。IL-4與其受體結(jié)合后,循JAK/STAT6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,將活化信號通過蛋白質(zhì)的相互作用逐級傳遞,最終激活特異性轉(zhuǎn)錄激活因子STAT6并啟動靶基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá),促進(jìn)靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信號通路的過度活躍參與包括哮喘等變態(tài)反應(yīng)性疾病、腫瘤等多種疾病的進(jìn)程。大量研究顯示STAT6-TAD可結(jié)合一系列轉(zhuǎn)錄共激活因子p100、CBP和NCoA-1等來提高

2、STAT6介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄活性和基因表達(dá)水平。但迄今為止,STAT6轉(zhuǎn)錄調(diào)控的機(jī)制尚不明確。PSF蛋白是我們前期通過GST融合蛋白釣取結(jié)合質(zhì)譜分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)的在IL-4刺激后可與STAT6-TAD結(jié)合的抑制IL-4/STAT6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路靶基因之一-Igε基因轉(zhuǎn)錄活性的轉(zhuǎn)錄抑制因子。本課題的研究目的在于初步探討PSF抑制Igε基因轉(zhuǎn)錄活性的分子機(jī)制。
   方法:本課題分兩部分進(jìn)行:第一部分,PSF與STAT6結(jié)合的位點(diǎn)研究,利用免疫共

3、沉淀法的方法確定PSF與STAT6結(jié)合的STAT6的功能位點(diǎn)。同時(shí)構(gòu)建含有PSF不同功能片段的真核表達(dá)質(zhì)粒,為進(jìn)一步研究STAT6與PSF結(jié)合的PSF的功能位點(diǎn)提供有力工具。第二部分,用染色質(zhì)免疫共沉淀的方法驗(yàn)證PSF是否影響STAT6與靶基因Igε啟動子結(jié)合的能力后,用western blotting檢測PSF對組蛋白H3乙?;揎椝降挠绊?。
   結(jié)果:①PSF通過STAT6-TAD與STAT6在細(xì)胞內(nèi)直接結(jié)合。并成功構(gòu)建

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