茶皂素抑制奶牛源耐藥金葡菌生物被膜的機制研究.pdf

1、乳房炎給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失，引起奶牛乳房炎的常見致病菌有金黃色葡萄球菌，無乳鏈球菌和大腸桿菌等等，其中尤以金黃色葡萄球菌最為常見，金黃色葡萄球菌導(dǎo)致奶牛乳房炎慢性感染的最重要因素在于其能在感染組織形成生物被膜。金黃色葡萄球菌ica基因座由操縱子icaADBC構(gòu)成，是合成PIA所需要的結(jié)構(gòu)基因。
　　目前治療奶牛乳房炎最常用的手段就是抗生素治療，但是隨著抗生素的大量使用，大量的多重耐藥菌株開始出現(xiàn)，因此選擇新型的治療思路與

2、替代藥物意義重大。相對于抗生素而言，茶皂素來自天然，是山茶科植物提取物，成本低廉，毒副作用少，殘留低，而且茶皂素抑制多重耐藥金黃色葡萄球菌生物被膜形成機制的研究目前尚未報道。
　　本論文探尋了茶皂素對金黃色葡萄球菌生物被膜形成的影響效應(yīng)，并進而研究其對成膜基因icaA表達(dá)的調(diào)控機制。該研究的進一步深入或可為奶牛源葡萄球菌的防治提供以生物被膜為靶標(biāo)的新型治療思路及實驗證據(jù)。
　　1.為了檢測奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌臨床分離株的

3、耐藥性，本研究利用二倍稀釋法檢測了奶牛乳房炎SA2臨床分離株對多種抗生素的耐藥性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該菌株對紅霉素、鏈霉素和青霉素G的最小抑菌濃度分別為1mg/mL、160μg/ml和640μg/ml，紅霉素屬于大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，鏈霉素屬于氨基糖苷類抗生素，青霉素G屬于β-內(nèi)酰胺類抗生素。并且檢測出耐藥基因mecA，所以得出該株奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌臨床分離株SA2既是MRSA菌株又是多重耐藥菌株。
　　2.通過PCR技術(shù)得到與金黃色葡

4、萄球菌成膜相關(guān)基因icaA。
　　3.不同濃度茶皂素對金黃色葡萄球菌分離株SA2成生物被膜的影響，結(jié)果顯示茶皂素抑制SA2形成生物被膜的最低濃度為100μg/ml.
　　4.不加茶皂素和茶皂素濃度為100μg/ml，做生長曲線檢驗茶皂素對金黃色葡萄球菌分離株SA2生長的影響，結(jié)果顯示茶皂素濃度為100μg/ml時對SA2沒有抑制生長的作用。
　　5.金黃色葡萄球菌分離株SA2電轉(zhuǎn)入綠色熒光質(zhì)粒，激光共聚焦顯微鏡觀察加藥

5、前后SA2成生物被膜的情況，結(jié)果顯示茶皂素濃度為100μg/ml時，SA2很難成膜。
　　6.利用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)檢測成膜基因icaA在加100μg/ml茶皂素前后的轉(zhuǎn)錄水平。結(jié)果顯示茶皂素為100μg/ml時，icaA的轉(zhuǎn)錄水平比正常情況下下降了。
　　綜上所述，本研究利用PCR擴增技術(shù)和RT-qPCR技術(shù)證明了山茶科植物提取物茶皂素能夠降低奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌icaA基因的轉(zhuǎn)錄水平，進而抑制金