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文檔簡(jiǎn)介
1、目前應(yīng)用最為廣泛的微生物殺蟲劑之一——蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱Bt),由于其田間應(yīng)用持效期較短,進(jìn)一步發(fā)展受到限制。主要原因之一是Bt易受外界環(huán)境因素(如紫外、高溫、干旱等)和自身因素(如定殖、毒力等)的影響。生物被膜是細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境的一種特殊的生長(zhǎng)狀態(tài),能調(diào)控細(xì)菌對(duì)環(huán)境脅迫的適應(yīng)能力,與細(xì)菌的定殖、侵染、毒力等多種特性密切相關(guān)。本研究通過篩選并鑒定產(chǎn)生物被膜Bt菌株,旨在探索生物被膜對(duì)Bt生物防
2、治效果的影響。
本研究對(duì)88株Bt菌株進(jìn)行生物被膜產(chǎn)生菌的篩選,獲得了一株高效形成生物被膜的Bt菌株XL6,其分離自內(nèi)蒙古自治區(qū)。Bt XL6菌株釋放的伴胞晶體為菱形,存在晶胞粘連現(xiàn)象,只有1條23kb的質(zhì)粒。Bt XL6菌株可以表達(dá)130kDa的原毒素,并且可被胰蛋白酶進(jìn)一步消化形成60kDa的活性毒素。Bt XL6菌株中含有生物被膜相關(guān)基因約74種。此外,Bt XL6菌株在LBP、LB培養(yǎng)基氣-液界面能形成清晰的膜狀結(jié)構(gòu)。
3、
進(jìn)一步利用mini-Tn10轉(zhuǎn)座子,構(gòu)建Bt XL6菌株隨機(jī)插入突變體庫(kù),篩選2株生物被膜形成能力顯著降低的突變株,找到其插入位點(diǎn)。這2株突變株插入位點(diǎn)均位于ggedf基因上游。GGDEF結(jié)構(gòu)域包含5個(gè)保守氨基酸,分別為甘氨酸2個(gè)、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸。與野生菌株Bt XL6相比,突變株的群游能力、生長(zhǎng)速度下降。此外,通過同源重組驗(yàn)證了ggdef基因?qū)ι锉荒ば纬傻挠绊憽R虼?,ggdef基因調(diào)控生物被膜的形成。
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