人乳腺癌細胞侵襲相關(guān)miRNAs的篩選及hsa-miR-339-5p生物學功能的初步研究.pdf

1、背景：MicroRNAs (miRNAs)是一種不編碼蛋白質(zhì)的單鏈小分子RNA，廣泛存在于真核生物中，通過對靶基因的翻譯抑制或切割降解來調(diào)控基因的表達。miRNAs在生物體內(nèi)的作用多樣而關(guān)鍵，不僅參與胚胎發(fā)育、脂肪代謝、細胞增殖、分化和凋亡等過程，還與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。其中已有的研究提示某些miRNAs的異常表達還與乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)。因此，miRNAs的生物學功能可能對乳腺癌的診斷和治療有著重要意義。
　　 目的：檢測

2、不同侵襲力乳腺癌細胞株中miRNAs的表達，篩選出與乳腺癌細胞侵襲力相關(guān)的miRNAs；檢測miR-339-5p在不同侵襲力乳腺癌細胞株中的表達，體外實驗驗證miR-339-5p的表達與乳腺癌細胞侵襲力的關(guān)系，并應(yīng)用生物信息學方法預(yù)測其可能的靶基因。
　　 方法：培養(yǎng)人低侵襲乳腺癌細胞株（MCF-7）和高侵襲乳腺癌細胞株（MDA-MB-468），分別提取總RNA，利用miRNA芯片技術(shù)檢測847種miRNAs在這兩株細胞中的表達

3、，以不同侵襲力細胞株間miRNAs表達差異＞2倍為標準，篩選出與乳腺癌細胞侵襲力有關(guān)的miRNAs；挑選出顯著下調(diào)的miR-339-5p并用qRT-PCR方法驗證其在MCF-7、MDA-MB-468和MDA-MB-231三種不同侵襲力乳腺癌細胞中的表達量；轉(zhuǎn)染外源性miR-339-5p inhibitors，通過CCK-8法與transwell侵襲實驗分別檢測96小時內(nèi)細胞增殖力的變化和轉(zhuǎn)染后細胞侵襲能力的改變；應(yīng)用生物信息學方法，預(yù)測

4、侵襲相關(guān)乳腺癌細胞miRNAs可能的靶基因。
　　 結(jié)果：（1）與MCF-7相比，MDA-MB-468中共有81個差異表達的miRNAs，其中45個上調(diào)，36個下調(diào)。顯著上調(diào)的有miR-29 a、miR-29 c和miR-125b，顯著下調(diào)的有miR-339-5p和miR-365；（2）qRT-PCR實驗結(jié)果顯示：miR-339-5p在MDA-MB-468和MDA-MB-231的表達量分別為在MCF-7中表達量的0.28和0.2

5、3；（3）與對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-339-5p inhibitors后96小時內(nèi)細胞增殖力的變化無統(tǒng)計學意義（P >0.05）；（4）與陰性熒光RNA和空白對照組相比，轉(zhuǎn)染miR-339-5p inhibitors后MCF-7細胞的侵襲力明顯增強（P<0.01）；（5）miR-339-5p有多個靶基因，可能參與調(diào)節(jié)細胞生長、分化、凋亡、轉(zhuǎn)錄和信號轉(zhuǎn)導等多種過程。
　　 結(jié)論：（1）獲得與乳腺癌侵襲相關(guān)的miRNA表達譜，并驗證