青蒿琥酯對(duì)宮頸癌HeLa和Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤放射增敏的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究青蒿琥酯(Artesunate)對(duì) p53突變型宮頸癌 HeLa細(xì)胞及p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用,并探討其作用機(jī)理的差異性,為青蒿琥酯作為腫瘤放療增敏藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：分別以濃度為1～2×107個(gè)／ml及1～2×108個(gè)／ml的 HeLa和Siha細(xì)胞懸液接種于裸鼠右大腿根部皮下建立宮頸癌 HeLa和 Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤模型,待移植瘤平均體積增至大約(5mm×5mm×5mm

2、),,隨機(jī)分為:對(duì)照組、單藥組(青蒿琥酯組)、單照組(10Gy)、藥物+照射組(青蒿琥酯+10Gy)。對(duì)照組與單照組:每只裸鼠腹腔注射生理鹽水每次0.2ml,1次／d,連續(xù)7d,單藥組與藥物+照射組每只裸鼠予以腹腔注射青蒿琥酯,將青蒿琥酯母液(50mg／ml)注射前用生理鹽水稀釋成10mg／ml,每只按100mg／kg／d量給予,每次0.2ml,1次／d,連續(xù)7d,第7d在給藥結(jié)束后1h將單照組與藥物+照射組移植瘤局部單次10Gy60C

3、oγ射線照射,照后觀察14d,14d后剝瘤,稱瘤重,測(cè)量移植瘤體積,計(jì)算抑瘤率及腫瘤體積抑制率,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線。流式細(xì)胞儀檢測(cè)移植瘤細(xì)胞周期,Western Blot法檢測(cè)移植瘤組織中cyclinB1、cdc2、wee1蛋白的表達(dá),并對(duì)移植瘤標(biāo)本進(jìn)行蘇木精-伊紅染色,免疫組化 S-P法測(cè)定移植瘤組織微血管密度(MVD),TUNEL法檢測(cè)移植瘤組織中腫瘤細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)果：(1)HeLa細(xì)胞接種10-15天后可以成功地建立皮

4、下移植瘤模型,成瘤率100％,Siha細(xì)胞接種15-20天后可以成功地建立皮下移植瘤模型,成瘤率100％；(2)青蒿琥酯對(duì)HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤有顯著的放射增敏作用,藥物+照射組瘤重(0.64±0.28)g明顯低于單照組(1.31±0.44)g(P<0.05),且抑瘤率67.67％高于單照組34.09％,差異顯著；處理后移植瘤平均體積藥物+照射組(579.18±120.36)mm3顯著低于單照組(979.36±289.00)mm3(P<

5、0.05),腫瘤體積抑制率61.59％明顯高于單照組35.05％；青蒿琥酯對(duì)Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤無明顯的放射增敏作用,藥物+照射組瘤重(0.82±0.22)g及移植瘤平均體積(657.43±100.52)mm3同單照組瘤重(0.88±0.35)g及移植瘤平均體積(717.20±148.55)mm3相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(3)HE染色病理切片顯示 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組細(xì)胞凋亡較單照組明顯增多,而 Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤藥

6、物+照射組細(xì)胞凋亡同單照組相比無明顯改變。(4)TUNEL法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)(50.30±5.91)％較單照組(30.20±5.09)％顯著增加(P<0.05),而Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)(38.80±5.25)％同單照組(36.60±5.52)％相比無明顯改變。(5)免疫組化S-P法檢測(cè)移植瘤標(biāo)本微血管密度結(jié)果顯示:對(duì)于 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤,藥物

7、+照射組移植瘤的微血管密度(9.75±2.99)顯著低于單照組(24.25±5.74)(P<0.05)；對(duì)于Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤,藥物+照射組移植瘤的微血管密度(17.25±4.35)同單照組(20.25±4.27)相比無明顯改變。(6)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn):HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組移植瘤細(xì)胞的G2／M期細(xì)胞比例(14.93±2.47)％較單照組移植瘤細(xì)胞的 G2／M期細(xì)胞比例(28.17±4.58)％下降(P<0.0

8、5),藥物+照射組移植瘤細(xì)胞的 G0／G1期細(xì)胞比例(50.84±1.12)％較單照組移植瘤細(xì)胞的 G0／G1期細(xì)胞比例(41.32±3.84)％上升(P<0.05),而Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤細(xì)胞的G0／G1期、S期、G2／M期細(xì)胞比例均無明顯變化。(7)Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn),HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組cyclinB1蛋白表達(dá)水平較單照組明顯升高,wee1蛋白表達(dá)水平較單照組明顯降低,cdc2蛋白在各處理組中的表達(dá)與

9、對(duì)照組無明顯差異。Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤藥物+照射組cyclinB1、cdc2、wee1蛋白表達(dá)水平同單照組相比均無明顯變化。
　　 結(jié)論：(1)青蒿琥酯對(duì)p53突變型宮頸癌 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤具有放射增敏作用,能明顯抑制60Coγ射線照射后 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤的生長(zhǎng),而對(duì)p53野生型Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤的放射增敏作用不明顯；(2)青蒿琥酯能增強(qiáng)由60Coγ射線所誘導(dǎo)的p53突變型 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤的細(xì)胞凋亡,而

10、對(duì)p53野生型Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤不存在這種作用；(3)青蒿琥酯聯(lián)合60Coγ射線能抑制p53突變型 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤的微血管生成,而對(duì)p53野生型Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤受照后的微血管生成無影響；(4)青蒿琥酯能抑制p53突變型宮頸癌 HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤因60Coγ射線照射所引起的 G2／M期阻滯,而不影響p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤照射后的細(xì)胞周期進(jìn)程；(5)青蒿琥酯可通過對(duì) G2期調(diào)控關(guān)鍵因子 cyclinB