青蒿素對(duì)宮頸癌HeLa和Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤放射增敏及作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討青蒿素(artemisinin)對(duì)p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞及p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞的裸鼠移植瘤模型的放射敏感性的影響。通過(guò)比較分析青蒿素對(duì)具有不同p53功能的宮頸癌細(xì)胞的裸鼠移植瘤的放射敏感性,進(jìn)一步研究放射增敏作用的機(jī)理。
　　 方法：每種細(xì)胞建立20只裸鼠皮下宮頸癌移植瘤模型,將荷瘤鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、青蒿素組、單純照射組、照射加青蒿素組?？瞻讓?duì)照組及單純照射組給予植物油0.2mL／d腹腔注射,青蒿

2、素組及照射加青蒿素組給予植物油與青蒿素的懸濁液50mg.kg-1.d-1腹腔注射,各組用藥均連續(xù)6d。6d后照射組給予荷瘤鼠右后肢移植腫瘤10Gy劑量一次性局部照射,照射后第14天脫頸處死荷瘤鼠。(1)測(cè)量每組腫瘤重量和體積,計(jì)算抑瘤率和腫瘤生長(zhǎng)抑制率；(2)利用免疫組化法檢測(cè)移植瘤TUNEL細(xì)胞凋亡和腫瘤組織的微血管密度,研究青蒿素對(duì)HeLa、Siha細(xì)胞的裸鼠移植瘤的放射敏感性的影響。(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)青蒿素聯(lián)合γ射線作用后,

3、HeLa和Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤的細(xì)胞周期分布情況；(4)應(yīng)用Western—blot法分析青蒿素聯(lián)合γ射線作用后對(duì)移植瘤細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白weel,cyclinB1,odc2表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果：(1)HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤的照射加青蒿素組移植瘤的質(zhì)量和體積與其他三組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤的照射加青蒿素組移植瘤質(zhì)量和體積與單

4、純照射組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HeLa細(xì)胞的青蒿素組、單純照射組、照射加青蒿素組的抑瘤率和腫瘤生長(zhǎng)抑制率分別為4.00％、31.49％、58.03％和5.57％、29.02％、51.03％；Siha細(xì)胞各組的抑瘤率和腫瘤生長(zhǎng)抑制率分別為0、33.00％、38.13％和0、37.39％、28.94％。(2)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織微血管密度顯示:HeLa細(xì)胞組的照射加

5、青蒿素組的微血管密度與其他三組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Siha細(xì)胞組的照射加青蒿素組的微血管密度與單純照射組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(3)TUNEL法檢測(cè)凋亡顯示:HeLa細(xì)胞組的照射加青蒿素組的凋亡率與其他三組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),但青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

6、):Siha細(xì)胞組的照射加青蒿素組的凋亡率與單純照射組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),青蒿素組與空白對(duì)照組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(4)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期顯示:對(duì)于HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤組,照射加青蒿素組的G0／G1期細(xì)胞比例高于單純照射組(P<0.05),照射加青蒿素組的G2／M期細(xì)胞比例則低于單純照射組(P<0.05)；對(duì)于Siha細(xì)胞移植瘤組,照射加青蒿素組與單純照射組相比,G0／G1期、G2／M期細(xì)胞含量均無(wú)

7、明顯變化(P>0.05)；(5)Western-blot分析顯示:對(duì)HeLa細(xì)胞移植瘤組,照射加青蒿素組weel蛋白表達(dá)量較單純照射組減少,cyclinB1蛋白較單純照射組增加,cdc2蛋白變化不明顯；在Siha細(xì)胞移植瘤組,照射加青蒿素組weel蛋白、cyclinB1蛋白、cdc2蛋白表達(dá)量較單純照射組均無(wú)明顯變化。
　　 結(jié)論：(1)青蒿素聯(lián)合γ射線照射后對(duì)p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞的裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用,而

8、對(duì)p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞的裸鼠移植瘤無(wú)明顯作用。(2)青蒿素能抑制p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤經(jīng)γ射線照射后的腫瘤組織的微血管密度,而對(duì)p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤受照后的微血管密度無(wú)影響；(3)青蒿素能增加p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤經(jīng)γ射線照射后的細(xì)胞凋亡率,而對(duì)p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤受照后的細(xì)胞凋亡率無(wú)影響；(4)青蒿素能抑制p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞的裸鼠移植瘤由

9、電離輻射所誘導(dǎo)活化的G2／M期阻滯,從而使更多帶有放射損傷的細(xì)胞因得不到足夠時(shí)間進(jìn)行修復(fù),直接進(jìn)入有絲分裂期,發(fā)生細(xì)胞死亡；而對(duì)p53野生型宮頸癌Siha細(xì)胞裸鼠移植瘤受照后的細(xì)胞周期無(wú)影響；(5)γ射線照射后,可通過(guò)增加周期蛋白weel的表達(dá),降低cyclinB1的表達(dá),誘導(dǎo)p53突變型宮頸癌HeLa細(xì)胞裸鼠移植瘤發(fā)生G2／M期阻滯；青蒿素聯(lián)合照射后使weel的表達(dá)量降低,cyclinB1的表達(dá)量增高,從而減弱G2／M期阻滯效應(yīng),發(fā)揮