p120在甲醛致氣道上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中對NF-κB信號通路的影響.pdf

1、甲醛（formaldehyde，F(xiàn)A），無色，易揮發(fā)，有強(qiáng)烈刺激性氣味，是一種非常常見的化學(xué)污染物。甲醛污染最常見的后果是刺激作用，此外甲醛還有致敏作用、免疫毒性、神經(jīng)毒性、遺傳毒性、生殖毒性和致癌性等等。長期接觸甲醛可引起人體慢性中毒性呼吸道疾病，甚至損傷DNA，誘導(dǎo)基因突變并提高機(jī)體罹患各種惡性腫瘤的幾率。
　　 氣道上皮是呼吸器官對抗有害刺激的第一道防線，各種有害刺激在機(jī)體抵抗力低下時均可引起肺部感染性疾病。氣道上皮在有害

2、刺激的攻擊下受到損傷，隨后啟動自身修復(fù)機(jī)制。
　　 P120-catenin(p120)是連環(huán)素家族成員，可在細(xì)胞膜上和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)調(diào)節(jié)鈣黏蛋白復(fù)合體、微管相關(guān)蛋白而參與細(xì)胞間的連接和運(yùn)動，還能轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核與各種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因的轉(zhuǎn)錄。
　　 細(xì)胞在靜息狀態(tài)下，NF-κB與其抑制蛋白IκB 結(jié)合形成三聚體而覆蓋了復(fù)合物中p50 亞基N 端的核定位信號(NLS),使此三聚體存留于胞質(zhì)中而不能發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)功能。外界刺

3、激可引起IκB 磷酸化、泛素化而降解，從而釋放NF-κB 轉(zhuǎn)位入核，激活下游靶基因轉(zhuǎn)錄。近年來有研究表明，p120 可通過RhoA 調(diào)節(jié)NF-κB 活性參與表皮慢性炎癥和上皮增殖的調(diào)節(jié)，但其中的確切機(jī)制尚未闡明。我們推測在氣道炎癥反應(yīng)中，p120 也可能通過NF-κB 信號途徑發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)通過建立甲醛暴露的體外模型，觀察p120在培養(yǎng)的人氣道上皮細(xì)胞損傷修復(fù)中的動態(tài)變化及其對核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 信號中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，

4、以期了解甲醛暴露后氣道上皮損傷修復(fù)的過程，進(jìn)一步闡明氣道上皮損傷修復(fù)及炎癥反應(yīng)發(fā)生的有關(guān)分子機(jī)制。
　　 目的：本實(shí)驗(yàn)使用甲醛刺激建立體外氣道炎癥反應(yīng)模型，初步探討甲醛刺激后氣道上皮細(xì)胞中p120的表達(dá)變化及其對NF-κB 信號通路的影響，從而進(jìn)一步分析氣道炎癥發(fā)生發(fā)展的有關(guān)機(jī)制。
　　 方法：
　　 使用甲醛刺激培養(yǎng)的人氣道上皮16HBE細(xì)胞，用相同濃度甲醛（100umol/L）分別處理1h，2h，3h，4h，

5、觀察培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；采用Western blot 技術(shù)、核漿分離方法檢測培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)p120、NF-κB p65、IκBα等蛋白表達(dá)變化；采用定量酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測培養(yǎng)液中IL-8表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.細(xì)胞形態(tài)學(xué)表現(xiàn)：
　　 對照組16HBE細(xì)胞立體感強(qiáng)，細(xì)胞間緊密連接，為上皮細(xì)胞典型的鋪路石狀形態(tài)。甲醛處理組16HBE細(xì)胞較為伸展和扁平，細(xì)胞間隙增寬，增加甲醛濃度這種變化更為明

6、顯，而更高濃度時大部分細(xì)胞將皺縮變圓，死細(xì)胞明顯增多。
　　 2.相關(guān)因子的表達(dá)變化:
　　 1)p120在正常氣道上皮細(xì)胞中含量豐富，甲醛刺激后，其表達(dá)呈減少趨勢。
　　 2)甲醛刺激可引起氣道上皮細(xì)胞中NF-κB 信號的活化，細(xì)胞內(nèi)總的NF-κBp65表達(dá)量增加。
　　 3)核漿分離免疫印跡顯示甲醛促使NF-κB 活性亞單位p65發(fā)生核內(nèi)轉(zhuǎn)位。
　　 4)ELISA 結(jié)果顯示NF-κB 靶基因

7、IL-8的表達(dá)明顯增強(qiáng)。
　　 5)甲醛刺激后NF-κB 抑制蛋白IκBα表達(dá)明顯減少。
　　 結(jié)論：
　　 （1）甲醛可導(dǎo)致培養(yǎng)的人氣道上皮細(xì)胞中p120表達(dá)下調(diào)。
　　 （2）甲醛可誘導(dǎo)氣道上皮細(xì)胞NF-κB 信號的活化及其靶基因IL-8的表達(dá)。
　　 （3）甲醛刺激可引起IκBα的磷酸化降解，從而釋放p65入核。（4）在甲醛引起的氣道炎癥反應(yīng)中，p120 可能具有負(fù)性調(diào)節(jié)NF-κB 信號途徑