三個新基因的代謝功能及結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、第一部分短期胰島素泵強化治療對初發(fā)2型糖尿病患者血漿Vaspin水平的影響
　　目的：觀察短期胰島素泵強化治療對于初發(fā)2型糖尿病(Type2diabetesmellitus，T2DM)患者的血漿內(nèi)臟脂肪組織來源的絲氨酸蛋白酶抑制劑(Visceraladiposetissue-derivedserineproteaseinhibitor，Vaspin)水平的影響，探討其與胰島素敏感性的關(guān)系。
　　方法：30例初發(fā)T2DM患者(

2、T2DM組)使用胰島素泵強化治療2周，采用高胰島素-正葡萄糖鉗夾術(shù)評價治療前后的胰島素敏感性，并用酶聯(lián)免疫法測定血漿Vaspin水平及代謝相關(guān)指標。
　　結(jié)果：T2DM患者組（T2DM）空腹血漿HOMA-IR、Vaspin水平高于正常糖耐量組(Normalglucosetolerance,NGT)和糖調(diào)節(jié)受損組(Impairedglucoseregulation，IGR)。經(jīng)胰島素泵強化治療后，T2DM組M值升高(2.99±0.4

3、2vs5.10±0.51mg·kg-1·min-1,P<0.05)，HOMA-IR降低[4.28(1.70~6.47)vs2.30(1.09~7.20),P<0.05]，血漿Vaspin水平也顯著降低(1.83±0.55vs1.19±0.57ng/ml,P<0.05),并且血漿Vaspin水平的降低與HOMA-IR的改變呈明顯正相關(guān)。
　　結(jié)論：胰島素泵強化治療可有效改善T2DM患者的胰島素敏感性，降低血漿Vaspin水平；并且T

4、2DM患者胰島素敏感性與血漿Vaspin水平有關(guān)。
　　第二部分TSLC1基因過表達對小鼠肝臟和脂肪細胞糖-脂代謝的影響
　　目的：探討肺癌腫瘤抑制物-1（Tumorsuppressorinlungcancer-1，TSLC1）基因過表達對小鼠肝細胞Hepa1-6和脂肪細胞3T3-L1糖-脂代謝相關(guān)基因的影響。
　　方法：擴增小鼠TSLC1基因編碼區(qū)并構(gòu)建pIRES2-EGFP-TSLC1過表達載體。將上述重組載體分別

5、轉(zhuǎn)染小鼠Hepa1-6肝細胞和3T3-L1脂肪細胞。采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測各組細胞內(nèi)TSLC1基因mRNA表達，以及糖-脂代謝相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子FAS，ACC，HSL，ATGL，GLUT1和GLUT4的mRNA表達變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染pIRES2-EGFP-TSLC1重組質(zhì)粒的肝臟和脂肪細胞內(nèi)TSLC1基因表達均顯著升高(P<0.05)。在TSLC1基因過表達的小鼠肝細胞中，F(xiàn)AS(P<0.01)和ACC(P<0.05)表達降

6、低，ATGL表達增加(P<0.05)；而TSLC1過表達對肝細胞內(nèi)HSL、GLUT1和GLUT4的表達無顯著影響。在TSLC1基因過表達的脂肪細胞中，ATGL表達增加(P<0.05)，但FAS、ACC、HSL、GLUT1和GLUT4的表達均無顯著改變。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建小鼠TSLC1基因過表達載體。TSLC1過表達在肝細胞和脂肪細胞中可能主要通過調(diào)節(jié)ATGL表達從而影響脂質(zhì)分解。在肝細胞內(nèi)，TSLC1過表達還可能通過影響FAS、

7、ACC表達從而調(diào)控肝細胞內(nèi)脂質(zhì)合成和脂肪酸β氧化，最終減少細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積。
　　第三部分人類新基因EOLA1核心啟動子的初步鑒定
　　目的：查找人類新基因內(nèi)皮高表達脂多糖相關(guān)因子-1（Endothelial-overexpressedlipopolysaccharide-associatedfactor1，EOLA1）核心啟動子的位置，為確定其轉(zhuǎn)錄起始位點，進一步研究其功能及轉(zhuǎn)錄調(diào)控提供基礎(chǔ)。
　　方法：針對人類EOL

8、A1基因5’-端上游可能包含啟動子序列的不同區(qū)域，采用PCR技術(shù)分別擴增4條缺失片段，分別將上述片段克隆至雙熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic，以構(gòu)建pGL3-Basic-F1，F(xiàn)2，F(xiàn)3，F(xiàn)4重組載體，并使用雙酶切及DNA測序法對重組載體進行鑒定，將鑒定克隆正確的重組載體分別轉(zhuǎn)染人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞（Humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）。運用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)驗證各片段的螢火蟲

9、熒光素酶活性（M1）和海腎熒光素酶（M2）活性比值。
　　結(jié)果：克隆出4條目的片段，并克隆至pGL3-Basic載體后，經(jīng)DNA測序驗證，重組載體構(gòu)建成功。重組載體轉(zhuǎn)染HUVEC細胞后，測得M1/M2值結(jié)果顯示pGL3-Basic-F1、F3和F4組均高于對照組（P<0.05），其中pGL3-Basic-F3組最高。
　　結(jié)論：成功構(gòu)建重組熒光素酶報告基因載體pGL3-Basic-F1、F2、F3和F4。雙熒光素酶活性檢測提