脂聯(lián)素基因多態(tài)性及其血漿濃度與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、背景：脂聯(lián)素（APN）是脂肪細(xì)胞分泌的特異性蛋白，在血循環(huán)中大量存在，是機(jī)體的脂質(zhì)代謝和血糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中重要的調(diào)節(jié)因子。脂聯(lián)素具有拮抗胰島素抵抗、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎等多種作用，其水平降低與2型糖尿病和大血管病變密切相關(guān)。脂聯(lián)素主要通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖與遷移，減少ox-LDL的攝取，抑制巨噬細(xì)胞的生成、吞噬活性及向泡沫細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，抑制平滑肌細(xì)胞的增殖與遷移，減少血管細(xì)胞粘附分子和清道夫受體的表達(dá)，從而發(fā)揮其抑制動(dòng)脈粥樣硬化形成的作用

2、。影響基因表達(dá)的位點(diǎn)主要由啟動(dòng)子或調(diào)節(jié)區(qū)域的基因所決定，所以脂聯(lián)素調(diào)控區(qū)域突變可能與冠心病相關(guān)。血漿脂聯(lián)素濃度與冠脈病變程度的半定量分析國(guó)內(nèi)外研究甚少。而國(guó)內(nèi)外脂聯(lián)素啟動(dòng)子序列-11377與-11391位點(diǎn)基因多態(tài)性及其血漿濃度，與冠脈病變程度及胰島素抵抗等冠心病危險(xiǎn)因素的相關(guān)性鮮見報(bào)道。 目的：本研究旨在通過(guò)觀察中國(guó)人是否存在APN基因SNP-11391和-11377兩位點(diǎn)變異,冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變患者體內(nèi)脂聯(lián)素水平與胰島素敏

3、感性的變化，探討脂聯(lián)素啟動(dòng)子序列基因多態(tài)性變異、脂聯(lián)素水平與冠狀動(dòng)脈病變程度、胰島素抵抗及冠心病其他危險(xiǎn)因素的相關(guān)性，以探明脂聯(lián)素在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展中的作用，及其與胰島素抵抗等其他冠心病危險(xiǎn)因素的相互影響。 方法：自2006年3月至2007年10月選擇上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院心內(nèi)科因懷疑冠心病而住院行冠脈造影患者共329例?；颊呷朐汉?，收集一般臨床資料，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)，包括空腹血糖及胰島素水平、TG、TC、HD

4、L-C、LDL-C等；同時(shí)抽取空腹靜脈血EDTA抗凝，分離血漿與有核血細(xì)胞，血漿采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)得血漿脂聯(lián)素濃度；分離獲得的血細(xì)胞應(yīng)用QIAGEN DNA Blood Mini Kit試劑盒按照說(shuō)明書中步驟抽提有核細(xì)胞基因組DNA，應(yīng)用由Primer Primer5設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)得到含有脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)與-11391位點(diǎn)的脂聯(lián)素啟動(dòng)子序列部分片段，分別用限制性內(nèi)切酶HhaI與MspI進(jìn)行酶切反應(yīng)，

5、得到不同基因片段從而判定脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)與-11391位點(diǎn)基因多態(tài)性。入選患者均行冠脈造影術(shù)，根據(jù)冠脈造影結(jié)果進(jìn)行分組；所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果： 1.根據(jù)冠脈造影結(jié)果從冠脈病變范圍分析血漿脂聯(lián)素濃度，各組間隨著病變支數(shù)的增加脂聯(lián)素濃度有減少趨勢(shì)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.058 P=0.028）。兩兩比較兩支與三支病變組與對(duì)照組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著病變支數(shù)的增加差異越來(lái)越顯著

6、，特別是三支病變組血漿脂聯(lián)素濃度顯著降低，但各病變支數(shù)組間比較均未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.根據(jù)Gensini評(píng)分對(duì)冠脈病變程度進(jìn)行分組分析血漿脂聯(lián)素濃度，各組間隨著病變程度的增加脂聯(lián)素濃度有減少趨勢(shì)，差異具有顯著差異（F=6.206 P<0.001）。在gensini評(píng)＜33分的輕度病變組I、II、III組之間兩兩比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而脂聯(lián)素在冠狀動(dòng)脈發(fā)生重度病變（gensini評(píng)分≥33分）時(shí)其血漿濃度顯著降低。 3.根

7、據(jù)臨床癥狀分組,本研究發(fā)現(xiàn)各種冠心病類型與對(duì)照組四組之間脂聯(lián)素濃度比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.825 P=0.010），雖然正常對(duì)照組與斑塊穩(wěn)定型的SAP組比較無(wú)差異，比較ACS、UA組與SAP均未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但ACS組、UA組與對(duì)照組比較均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P值分別為0.001，0.001。 4.對(duì)冠心病危險(xiǎn)因素做Logistic回歸分析：結(jié)果顯示，血漿脂聯(lián)素濃度、HDL-C、年齡、吸煙史、糖尿病史進(jìn)入最后的回歸方程

8、（Y=-0.610+ 0.035*年齡+ 0.609*吸煙-0.990*HDL+0.665*DM -0.054*脂聯(lián)素）。校正年齡，吸煙，糖尿病史與HDL-C后對(duì)血漿脂聯(lián)素濃度與冠心病做相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，脂聯(lián)素與冠心病仍密切相關(guān)（OR=-0.192，P<0.01） 5.將脂聯(lián)素濃度（對(duì)數(shù)值）與冠心病危險(xiǎn)因素：性別、年齡、BMI、WHR、SBP、DBP、Lg（FPG）、Lg（FINS）、ISI、Lg（HOMA-Aβ）、Lg（H

9、OMA-AR）、TG、TC、HDL-C、LDL-C、吸煙史、糖尿病史進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)性別、年齡、HDL-C、ISI與脂聯(lián)素濃度成正相關(guān)，與吸煙、BMI、WHR、FPG、FINS、HOMA-Aβ、HOMA-AR負(fù)相關(guān)。 6.整體比較-11377位點(diǎn)CG+GG基因型比CC基因型脂聯(lián)素濃度明顯降低，差異顯著（P=0.002），冠心病組CC型與CG+GG型比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.025） 7.冠心病組與對(duì)照組三種基

10、因型頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=12.86，P=0.002），而冠心病組G等位基因頻率明顯高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=11.769，P=0.0006）。根據(jù)冠脈造影結(jié)果將入選病例分成對(duì)照組、一支、兩支、三支病變組，各組間脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)基因分型有顯著差異（c2=17.935 P=0.006），但各病變支數(shù)間兩兩比較差異不顯著，等位基因頻率各組之間具有顯著差異性（c2=15.097 P=0.002）；根據(jù)患者冠脈

11、造影最終積分按照四分位數(shù)而分成4組：I組（0-2分）、II組（3-12分）、III組（13-32分）、IV組（33-160分）。結(jié)果顯示不同病變程度各組之基因分型無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=10.827，P=0.094），兩兩比較II、III、IV組與I組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P值分別為0.039，0.029，0.031。等位基因基因頻率各組之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=8.614，P=0.035）；根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行分組，AMI、UA、SAP組與對(duì)

12、照組四組之間脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)基因型分布頻率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=14.777，P=0.022）。而-11377等位基因頻率各組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（c2=6.616，P=0.085）。 8.脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)CC型與GC+GG型兩組比較胰島素抵抗情況結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ISI與HOMA-AR在兩組之間具有顯著性差異，P值分別為0.003，0.004。比較兩組間其他冠心病危險(xiǎn)因素，結(jié)果顯示兩組比較TC差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=

13、0.047），空腹胰島素具有顯著性差異（P=0.006），且他危險(xiǎn)因素兩組比較未均未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 9.冠心病危險(xiǎn)因素的Logistic回歸分析，發(fā)現(xiàn)脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)入方程，且校正年齡、吸煙、糖尿病史、HDL-C與LDL-C后對(duì)脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)基因多態(tài)性與冠心病做偏相關(guān)分析，結(jié)果顯示，脂聯(lián)素-11377位點(diǎn)基因多態(tài)性與冠心病仍顯著相關(guān)（OR=0.209，P<0.01）。 結(jié)論： 低脂聯(lián)素血癥是冠心