三七皂苷動(dòng)員apoE---小鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞防治動(dòng)脈粥樣硬化及其機(jī)制的研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)由于高發(fā)病率、高致殘率和高死亡率嚴(yán)重威脅人類的生存質(zhì)量和期望壽命。作為眾多心血管疾病發(fā)生的病理基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié),AS防治已成為全世界共同關(guān)注的重大課題。動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷和功能失調(diào)被認(rèn)為是AS發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)和重要的病理基礎(chǔ),因此,受損動(dòng)脈內(nèi)皮單層的恢復(fù)和重建成為防治AS的必要條件。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為內(nèi)皮細(xì)胞可通過增殖并遷徙至受損區(qū)域,發(fā)揮修復(fù)功能,但是成熟的內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力非常有限。近年來的

2、研究表明內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)強(qiáng)大的修復(fù)血管內(nèi)皮的作用可減緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程,因此,通過藥物動(dòng)員內(nèi)源性EPCs,從而增加循環(huán)中EPCs的數(shù)量,加速損傷內(nèi)膜的重新內(nèi)皮化成為防治AS的有效途徑。三七皂苷(panaxnotoginsengsaponins,PNS)是活血化瘀中藥三七的主要活性成分,本室前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明PNS通過多途徑防治AS。本研究將探討PNS通過對(duì)骨髓來源EPCs的動(dòng)

3、員、增強(qiáng)損傷血管內(nèi)皮化與其防治AS的關(guān)系,并初步揭示其相關(guān)機(jī)理,以期為深化三七內(nèi)皮保護(hù)及AS防治作用機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　8周齡apoE-/-小鼠均予以高脂飼料并隨機(jī)分為模型組、PNS低劑量組和PNS高劑量組,分別給予生理鹽水、60mg/kg和120mg/kgPNS腹腔注射。8周后,對(duì)apoE-/-
　　小鼠胸主動(dòng)脈進(jìn)行HE、彈力纖維和β-半乳糖苷酶染色,并在光鏡下觀察病理形態(tài)學(xué)改變;流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨

4、髓和外周血CD117+/Ly-6+和FLK+/Ly-6+細(xì)胞并計(jì)數(shù);ELISA方法測(cè)定血清和骨髓上清中的MMP-9,SDF-1α和SCF濃度;免疫組織化學(xué)方法測(cè)定胸主動(dòng)脈VWF、α-SMA、SDF-1α和CXCR4表達(dá),骨髓SDF-1α和CXCR4表達(dá);Real-timePCR法檢測(cè)骨髓SDF-1α、CXCR4、PI3K、c-Kit和SCFmRNA表達(dá)以及和胸主動(dòng)脈SDF-1α、CXCR4mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1.與

5、模型組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組斑塊面積均顯著性減少(P<0.05或P<0.01),內(nèi)膜與中膜比值(P<0.01)顯著降低。
　　2.與模型組相比,PNS兩個(gè)劑量組胸主動(dòng)脈VWF陽性細(xì)胞層的長(zhǎng)度顯著增加(P<0.01);內(nèi)膜α-SMA含量較模型組顯著下降(P<0.05或P<0.01)。
　　3.光鏡下,模型組胸主動(dòng)脈彈力纖維層數(shù)明顯減少,排列疏散,并且有多處斷裂現(xiàn)象,而PNS組彈力纖維則排列致密,連續(xù),未

6、發(fā)生斷裂;與模型組比較,60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動(dòng)脈β-半乳糖苷酶染色后的藍(lán)色面積明顯減少。
　　4.與模型組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組骨髓和外周血中CD117+/Ly-6+和FLK+/Ly-6+標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)明顯增加(P<0.05或P<0.01)。
　　5.60mg/kg和120mg/kgPNS組外周血中SDF-1α和SCF濃度較模型組顯著性升高(P<0.05或P<0.01),MMP-

7、9濃度較模型組沒有顯著變化。120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α濃度較模型組顯著性下降(P<0.01),60mg/kg和120mg/kgPNS組SCF和MMP-9濃度較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01)。
　　6.與模型組相比,120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α表達(dá)顯著下降(P<0.01),60mg/kg和120mg/kgPNS組CXCR4表達(dá)均顯著增加(P<0.05或P<0.01)。
　　7.與模型

8、組相比,60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動(dòng)脈中SDF-1α、CXCR4表達(dá)均顯著增加(P<0.05或P<0.01)
　　8.60mg/kg和120mg/kgPNS組骨髓中SDF-1α、CXCR4、SCF和PI3KmRNA表達(dá)均較模型組顯著升高(P<0.05或P<0.01),c-KitmRNA表達(dá)未見顯著變化。60mg/kg和120mg/kgPNS組胸主動(dòng)脈中SDF-1α、CXCR4mRNA表達(dá)均較模型組顯著升高(P<0