兔損傷性膽管狹窄模型的建立及絲裂霉素C涂層支架的制作.pdf

1、目的:
　　 探討建立損傷性膽管狹窄動物模型的方法，研究膽管損傷性狹窄的病理基礎(chǔ)；制作一種帶有絲裂霉素C涂層的膽道支架，觀察帶藥支架藥物釋放的規(guī)律。
　　 方法:
　　 第一部分10只新西蘭兔（3±0.2kg）隨機分為實驗組1和實驗組2，分別制作膽管狹窄模型：實驗組1采用膽管部分縫扎法，實驗組2采用膽管接觸電凝法。術(shù)后觀察動物的一般狀況、生存率、肝功能變化；術(shù)后30天觀察膽管組織學(xué)變化，免疫組織化學(xué)SP法測量病變

2、組織的轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)及平滑肌α-肌動蛋白(a-SMA)表達。
　　 第二部分將絲裂霉素C(MMC)和聚乳酸(PLA)粉末以1％的帶藥濃度溶于兩者的共同溶劑四氫呋喃(THF)中。并將6Fr膽道引流管浸泡于上述溶劑中，10分鐘后取出真空烘干，常溫避光保存。通過測重計算支架所載MMC的質(zhì)量；采用PH7.4PBS緩沖液將絲裂霉素C稀釋為系列標準液，在365nm紫外分光峰面積進行相關(guān)分析。將絲裂霉素C涂層支架放入PBS緩

3、沖液中，置于37℃的恒溫搖床中持續(xù)浸泡24h，然后浸泡于新鮮的PBS溶液中，如此每天重復(fù)浸泡，直至30天。以標準PBS液為對照組，對第1-30天留取的浸出液進行色譜分析，計算MMC在浸出液中的濃度。
　　 結(jié)果:
　　 第一部分兩種方法均能造成膽管狹窄，兩實驗組30d后生存率無明顯差異，兩組動物術(shù)前及術(shù)后的肝功能檢測結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；實驗動物損傷處狹窄形成，上段膽管明顯擴張至7-8mm膽囊可見明顯增大；病

4、理觀察可見炎性細胞浸潤，粘膜下膠原纖維增生明顯，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示狹窄處膽管組織TGF-β1及α-SMA的表達均高于正常膽管組織。
　　 第二部分稱量測得每根支架上MMC的負載量為216.2±2.04μg，單位面積的載藥量為0.732±0.007μg/mm2。絲裂霉素C均能從支架表面持續(xù)釋放，第1天釋放1.81±0.06μg/ml，第2天釋放1.24±0.04μg/ml，之后波動在0.61-0.84μg/ml，第21天后開始略