局部應用絲裂霉素C對良性膽管狹窄形成影響的實驗研究.pdf

1、膽管瘢痕狹窄多由膽管損傷、肝膽管結石和膽管炎反復發(fā)作所致，其后果可導致阻塞性黃疸進而引起肝實質損害，膽汁性肝硬化，治療頗為棘手且預后極差。目前，采用的治療方法仍以外科手術為主，對膽管再狹窄的預防措施也是圍繞手術時機、手術方式的選擇、精細的操作及吻合口大小等方面進行經驗性總結。有報道應用腎上腺皮質激素預防膽管瘢痕增生防止膽管再狹窄，但具體療效尚缺乏確定的結果。因此，對膽管瘢痕狹窄形成機理和防治方法的深入研究，具有非常重要的意義。
　

2、　 許多抗纖維化的藥物證實在增生性疾病中有效，絲裂霉素C(Mitomycin C，MMC)是由頭狀鏈霉菌分離出來的抗腫瘤抗生素，目前認為，MMC對于成纖維細胞增殖的抑制作用，是氟尿嘧啶的100倍，并具有時間依從性，作用時間可達到無限期抑制增生，同時與劑量密切相關，大劑量時可以成為不可逆性抑制。已明確，局部應用MMC對瘢痕的形成具有預防和治療的作用，并在眼科、整形外科、耳鼻喉、泌尿、骨科及上消化道等領域的瘢痕預防和消除中廣泛應用，效果頗

3、佳。
　　 目的:
　　 探討MMC對雄性SD大鼠膽總管電凝損傷后良性狹窄形成預防的作用，研究其在膽管良性狹窄疾病中的應用可行性，為臨床防治膽管狹窄尋求一條新的途徑。
　　 方法:
　　 48只雄性SD大鼠(體重180-200g)用于研究。其中40只隨機分成4組：假手術組、膽道狹窄模型組、電凝+低濃度藥物組、電凝+高濃度藥物組。8只做為藥物空白對照組。
　　 動物麻醉后，將所有大鼠先于近肝門膽總管

4、分叉下分離膽管周圍軟組織約1cm，假手術組關腹。膽道狹窄模型組大鼠，采用電凝鉤8J能量于分叉下約0.5cm處電凝膽總管。藥物組(電凝+藥物1組：MMC濃度0.4mg/ml；電凝+藥物2組：MMC濃度0.6mg/ml)繼而于膽管損傷處采用完全浸潤MMC1毫升的明膠海綿(1×1×0.5cm3)包繞，5分鐘后取出明膠海綿，藥物空白對照組采用電凝處理同膽道狹窄模型組大鼠，繼而于膽管損傷處采用完全浸潤注射用水的1毫升的明膠海綿(1×1×0.5cm

5、3)包繞，5分鐘后取出明膠海綿。術后繼續(xù)飼養(yǎng)15天處死。
　　 記錄所有大鼠術前及術后體重、進食和精神狀況以及黃染，抽取門靜脈學檢測血常規(guī)、肝功能等指標，并記錄肝臟和腹水情況。取膽管組織采用10％福爾馬林固定后石蠟包埋并制成切片。對各組動物的膽管組織進行HE染色、Masson三色染色檢測膽管膠原纖維構筑形態(tài)，測定膽管壁厚度，并進行顯微鏡檢查。采用免疫組化法檢測轉化生長因子(transforming growth factor-β

6、，TGF-β)，α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscle actin，α-SMA)，增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)，血管內皮生長因子(vascular epithelial growth factor,VEGF)，并記錄毛細血管增生情況。所有指標在各組間的差異采用單因素方差分析。
　　 結果:
　　 膽道狹窄模型組和藥物空白對照術后15天表現為阻塞

7、性黃疸，血漿膽紅素和谷丙轉氨酶均明顯高于假手術組。用藥1組和2組，血漿膽紅素升高程度均低于單純膽道狹窄模型組，且用藥2組低于用藥1組。術后15天血常規(guī)檢查顯示，膽道狹窄模型組白細胞高于假手術組(P＜0.05)，紅細胞和血小板均無明顯差異。
　　 膽道狹窄模型組和藥物空白對照組損傷部位存在明顯膽管狹窄，狹窄部位以上膽管擴張明顯，直徑為假手術組的5倍以上，部分大鼠伴有腹水。用藥組膽總管輕度狹窄，狹窄部位以上膽管直徑為正常管徑的1～3

8、倍，無腹水表現。
　　 病理檢查顯示：膽道狹窄模型組膽管損傷部位組織，成纖維細胞增生活躍，膽管壁顯著纖維化增厚，炎性細胞廣泛浸潤。Masson三色染色見膽管粘膜下大量膠原纖維增生，排列致密紊亂。膽道狹窄模型組膽管壁厚度明顯高于假手術組(5.88±0.67mm vs2.76±0.22 mm，P＜0.01)。用藥組則膽管壁增厚不明顯，用藥2組膽管壁增厚與假手術組無顯著差異(3.12±0.45 vs2.76±0.22，P＞0.05)。

9、
　　 免疫組化結果顯示：(1)TGF-β、α-SMA、PCNA陽性細胞數，藥物處理組與空白對照組、模型組、假手術組之間均有差異顯著(P＜0.01)，并且用藥1組及用藥2組之間也有顯著差異(P＜0.01)；(2)VEGF陽性積分和微血管密度的檢測結果，膽道狹窄模型組和用藥組明顯高于假手術組(P＜0.01)，模型組和藥物空白對照組結果相近；(3)微血管密度的檢測結果，膽道狹窄模型組則明顯低于用藥組(P＜0.01)，模型組和藥物空白

10、對照組結果相近，用藥1組及用藥2組之間無顯著差異。
　　 結論:
　　 (1)通過電凝損傷膽管法可以建立大鼠良性膽管狹窄模型，該模型主要病理變化是膽管壁成纖維細胞增殖和膠原纖維過度增生，同時伴TGF-β、α-SMA、PCNA、VEGF等明顯升高；
　　 (2)局部短期應用MMC可以抑制膽管成纖維細胞的過度增殖和膠原纖維的交聯(lián)，對膽管良性狹窄起到一定預防作用；但對大鼠術后體重、血常規(guī)和肝功能無毒副作用；(3)0.6