JNK激酶途徑調(diào)控BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化.pdf

1、目的:前期研究發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein，BMP9)有較強(qiáng)的誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cell，MSCs)向成骨分化的潛力，但是其具體的作用機(jī)制還不甚清楚。本課題旨在確認(rèn)絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPKs）中的JNK(c-Jun N-terminal kinases)激酶途徑對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞

2、成骨分化的調(diào)控作用及其相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:利用重組腺病毒將BMP9導(dǎo)入間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2、MEF、C2C12，通過Western印跡和熒光素酶報告基因檢測JNK的磷酸化水平;利用JNK特異性抑制劑SP600125和RNA干擾技術(shù)抑制JNK活性后，以堿性磷酸酶(ALP)活性測定分析早期成骨指標(biāo)ALP的變化，利用茜素紅S檢測鈣鹽沉積;通過RT-PCR檢測成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子RUNX2和成骨靶基因ID1、ID2、ID3、C

3、ol1的表達(dá);通過Western印跡和熒光素酶報告基因檢測Smad1/5/8的活性;通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測OCN和OPN的表達(dá);動物實驗驗證在RNA沉默JNK蛋白激酶后，對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2異位成骨的影響。
　　結(jié)果:BMP9可以增強(qiáng)JNK激酶的磷酸化;利用JNK抑制劑SP600125抑制JNK激酶活性后，BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的早期成骨指標(biāo)ALP活性以及晚期指標(biāo)鈣鹽沉積、OCN和OPN的表達(dá)均受到抑制，

4、而且經(jīng)典Smad1/5/8的活化也受到抑制。同時，成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子RUNX2和成骨靶基因ID1、ID2、ID3、Col1的表達(dá)也相應(yīng)受到抑制;RNA干擾沉默JNK基因表達(dá)后，同樣也抑制了BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞的ALP活性、鈣鹽沉積和裸鼠皮下異位成骨。
　　結(jié)論:總之，我們的結(jié)果表明，BMP9可活化JNK激酶途徑，而且JNK活性受到抑制后，BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化也受到抑制，表明BMP9可活化JNK激酶途徑