厄洛替尼治療Lewis肺癌荷瘤小鼠的時(shí)辰藥理學(xué)作用及相關(guān)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)建立Lewis肺癌細(xì)胞皮下移植瘤小鼠動(dòng)物模型，研究厄洛替尼按晝夜不同時(shí)辰點(diǎn)給藥的抗腫瘤作用及毒副作用，并從表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)-蛋白激酶B(PKB/AKT)-細(xì)胞周期蛋白(CyclinD1)-周期素依賴(lài)性激酶4(CDK-4)通路探討其可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒⑴c分組:建立Lewis肺癌細(xì)胞皮下移植瘤小鼠動(dòng)物模型，隨機(jī)將荷瘤小鼠分為模型組、低劑量組(15mg·kg-1)、中劑量組(30 mg

2、·kg-1)、高劑量組(60mg·kg-1)，每組隨機(jī)分為8:00、12:00、16:00、20:00、24:00、04:00六個(gè)時(shí)辰點(diǎn)組，空白對(duì)照組不種瘤。
　　2.給藥:厄洛替尼各組分別在對(duì)應(yīng)的六個(gè)時(shí)辰點(diǎn)口服灌胃給予相對(duì)應(yīng)劑量厄洛替尼0.2ml，模型組和空白對(duì)照組給予同樣體積的羧甲基纖維素鈉溶液和蒸餾水。
　　3.藥效學(xué)指標(biāo)檢測(cè):觀(guān)察小鼠生活質(zhì)量，每天測(cè)小鼠體重，每隔3天測(cè)小鼠腫瘤體積，繪制瘤體的生長(zhǎng)曲線(xiàn)。第21天取血后

3、斷頸處死小鼠，剝離腫瘤，稱(chēng)瘤重，計(jì)算抑瘤率;血常規(guī)檢測(cè)白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅蛋白等的變化。
　　4.相關(guān)基因表達(dá):用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantificational Real Time-PCR)檢測(cè)不同時(shí)辰點(diǎn)小鼠腫瘤組織中EGFR、AKT1、AKT2、CDK-4和CyclinD1 mRNA的表達(dá)水平。
　　5.相關(guān)蛋白表達(dá):蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)不同時(shí)辰點(diǎn)給藥后腫瘤組織中蛋白AKT、P-AKT、CyclinD1的表

4、達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.厄洛替尼低中高劑量組的腫瘤生長(zhǎng)較模型組均有明顯抑制(P＜0.05)，中劑量組和高劑量組較低劑量組腫瘤生長(zhǎng)緩慢(P＜0.05)，中高劑量組之間無(wú)顯著性差異。
　　2.不同時(shí)辰點(diǎn)比較，厄洛替尼組腫瘤生長(zhǎng)明期(8:00、12:00、16:00)較暗期(20:00、24:00、04:00)明顯減慢(P＜0.05);16:00組生長(zhǎng)最慢(P＜0.05)。
　　3.與空白對(duì)照組比較，模型組白細(xì)胞

5、、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯升高(P＜0.05)，血紅蛋白明顯降低(P＜0.05);與模型組比，24:00、04:00組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞明顯升高(P＜0.05)，16:00、20:00組血紅蛋白降低明顯（P＜0.05）。
　　4.與模型組比較，用藥組8:00、12:00、16:00、20:00、04:00各組瘤重明顯減輕(P＜0.05)，其中16:00組抑瘤效果最好(P＜0.05)。
　　5.模型組腫瘤細(xì)胞排列

6、正常，幾乎沒(méi)有觀(guān)察到細(xì)胞死亡;厄洛替尼給藥組8:00、12:00、16:00、20:00出現(xiàn)大面積壞死、炎細(xì)胞浸潤(rùn)和出血，24:00、04:00組出現(xiàn)小面積壞死和少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　6.與模型組比較，8:00、12:00、16:00組EGFR基因表達(dá)相對(duì)量降低(P＜0.05)，各組之間表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，8:00、12:00、16:00、20:00組AKT1基因表達(dá)相對(duì)量降低(P＜0.05)，16:00組降低幅度最

7、大(P＜0.05); CDK-4基因表達(dá)各組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，8:00、12:00、16:00、20:00組CycllinD1基因表達(dá)相對(duì)量降低(P＜0.05)，各組之間表達(dá)無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　7.與模型組比較，AKT蛋白各時(shí)辰點(diǎn)表達(dá)量無(wú)顯著性差異;P-AKT蛋白表達(dá)在12:00和16:00明顯降低(P＜0.05); CyclinD蛋白表達(dá)在8:00、12:00、16:00和04:00明顯降低(P＜0.