Id2通過非HLH結(jié)構(gòu)域促進(jìn)MCF-7與SKOV-3細(xì)胞的侵襲性.pdf

1、目的：研究Id2基因的表達(dá)對(duì)侵襲性較弱，且ER受體表達(dá)陽性的乳腺癌細(xì)胞MCF-7和卵巢癌細(xì)胞SKOV-3的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性
　　 方法：①用重疊延伸法PCR擴(kuò)增Id2-DBM的HLH缺失體；將野生型Id2、Id2-DBM與Id2-DBM-δHLH連接到pCDNA3.1(+)載體內(nèi)。②Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δ HLH在乳腺癌MCF-7細(xì)胞株中過表達(dá)，Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平，RT-PCR法檢

2、測(cè)mRNA表達(dá)水平；描繪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell法檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力；并用Western Blot方法分析細(xì)胞粘附分子E-cardherin的表達(dá)水平。③Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δ HLH在卵巢癌SKOV-3細(xì)胞株中過表達(dá)，Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)水平，RT-PCR法檢測(cè)mRNA表達(dá)水平；描繪細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell法檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力；并用Western Blot方法分析

3、細(xì)胞粘附分子E-cardherin的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 ①獲得Id2-DBM-δHLH，并成功構(gòu)建pCDNA3.1-Id2、pCDNA3.1-Id2-DBM和pCDNA3.1-Id2-DBM-δHLH。
　　 ②Western Blot及RT-PCR檢測(cè) Id2、Id2-DBM與Id2-DBM-δHLH mRNA在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MCF-7和SKOV-3細(xì)胞中表達(dá)升高。
　　 ③MTT法檢測(cè)生長(zhǎng)曲線

4、顯示Id2、Id2-DBM和Id2-DBM-δHLH過表達(dá)后對(duì)MCF-7和SKOV-3細(xì)胞生長(zhǎng)無明顯影響(P>0.05).
　　 ④細(xì)胞爬片劃痕實(shí)驗(yàn)Id2、Id2-DBM、Id2-DBM-δHLH過表達(dá)的MCF-7和SKOV-3在24小時(shí)，細(xì)胞遷徙相對(duì)距離較為顯著，爬片生長(zhǎng)遷徙能力明顯比僅轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的強(qiáng)。
　　 ⑤Transwell細(xì)胞運(yùn)動(dòng)穿膜實(shí)驗(yàn)，MCF-7/pcDNA3.1、MCF-7/pcDNA3.1-Id2、MC

5、F-7/pcDNA3.1-ld2-DBM和MCF-7/pcDNA3.1-Id2-DBM-δHLH組13h100倍視野中穿膜細(xì)胞數(shù)分別為78.8±8。198、101.4±17.31、138.8±20.584、112.2±15.385。SKOV-3/pcDNA3.1、SKOV-3/pcDNA3.1-1d2、SKOV-3/pcDNA3.1-1d2-DBM和SKOV-3/pcDNA3.1-Id2-DBM-δHLH組16h穿膜細(xì)胞數(shù)分別為135.

6、4±17.33、163±23.873、211.8±21。65、204.3±19.77。Id2、Id2-DBM、Id2-DBM-δHLH過表達(dá)后的MCF-7和SKOV-3的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯比僅轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的多(P<0.01)。
　　 ⑥Id2-DBM、Id2-DBM-δHLH過表達(dá)的MCF-7和SKOV-3細(xì)胞E-cardherin的蛋白水平明顯降低，說明MCF-7和SKOV-3細(xì)胞Id2的表達(dá)與E-cadherin的表達(dá)呈反相關(guān)。<