Numb蛋白對(duì)α-synuclein蛋白的寡泛素化水平調(diào)控.pdf

1、背景：
　　帕金森病(Parkinson's disease，PD)是一種常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，以運(yùn)動(dòng)遲緩，肌強(qiáng)直和靜止性震顫為主要臨床特征。在帕金森患者腦內(nèi)，死亡的神經(jīng)細(xì)胞多是位于黒質(zhì)區(qū)的多巴胺神經(jīng)元且多在臨床癥狀之前出現(xiàn)，當(dāng)有明顯臨床癥狀時(shí)，大約有70％多巴胺神經(jīng)元可能已經(jīng)死亡。帕金森病的病理特征是多巴胺神經(jīng)元中α-synuclein(α-syn)包涵體的出現(xiàn)，該蛋白是路易小體(Lewybody)的主要成分。異常折疊聚集的α-

2、syn蛋白可形成低聚物，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，是帕金森病致病的的主要病理過(guò)程。
　　Numb蛋白是一種進(jìn)化保守的膜受體蛋白，在果蠅神經(jīng)系統(tǒng)研究中發(fā)現(xiàn)其具有細(xì)胞命運(yùn)決定子的作用。它具有多種蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的區(qū)域，包括磷酸酪氨酸結(jié)合域(PTB)和羧基端結(jié)構(gòu)域，PTB結(jié)構(gòu)域可與泛素連接酶，如Siah1、Lnx等相互作用，對(duì)靶蛋白進(jìn)行泛素化修飾。羧基端結(jié)構(gòu)域包含一個(gè)EH結(jié)構(gòu)域結(jié)合基序和α-銜接蛋白結(jié)合位點(diǎn)，可與相關(guān)靶蛋白結(jié)合，參與調(diào)控受體蛋

3、白胞內(nèi)循環(huán)、胞內(nèi)移行。Numb是一種內(nèi)吞蛋白，參與神經(jīng)突生長(zhǎng)和細(xì)胞遷移過(guò)程。此外，Numb通過(guò)與Notch相互拮抗，參與調(diào)節(jié)多種生化信號(hào)途徑、調(diào)節(jié)粘附和緊密連接等諸多過(guò)程。有研究表明Numb/Notch信號(hào)通路通過(guò)調(diào)控泛素蛋白酶體系統(tǒng)，參與某些蛋白的泛素化調(diào)控。
　　關(guān)于Numb蛋白對(duì)α-syn蛋白寡泛素化水平的調(diào)控在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道，本課題將深入探求Numb蛋白是否通過(guò)參與調(diào)控α-syn蛋白寡泛素化修飾模式，參與帕金森病的致

4、病過(guò)程。為帕金森病的早期診斷與治療提供新的思路和方法。
　　目的：
　　探索Numb蛋白對(duì)α-突觸核蛋白(α-synuclein，α-syn)寡泛素化水平的調(diào)控。
　　方法：
　　將EGFP-N1、EGFP-Numb分別與HA-α-syn轉(zhuǎn)染SH-SY5Y細(xì)胞;利用細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)α-syn蛋白和Numb蛋白的亞細(xì)胞共定位;利用免疫共沉淀的方法檢測(cè)Numb蛋白與α-syn蛋白的相互結(jié)合;利用Westernblo

5、t技術(shù)檢測(cè)Numb蛋白對(duì)α-syn蛋白寡泛素水平的調(diào)控;在MPP+細(xì)胞模型中利用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Numb對(duì)α-syn包涵體形成的影響。
　　結(jié)果：
　　Numb與α-syn在細(xì)胞質(zhì)中存在亞細(xì)胞共定位;
　　Numb蛋白上調(diào)α-syn寡泛素化水平;
　　Numb蛋白通過(guò)促使α-syn寡泛素水平上調(diào)誘導(dǎo)MPP+細(xì)胞模型中α-syn陽(yáng)性包涵體形成。
　　結(jié)論：
　　Numb蛋白上調(diào)α-syn蛋白寡泛素水平并