版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、p53蛋白是人體內(nèi)的重要的癌癥抑制劑之一,也是細胞在應(yīng)激狀態(tài)下必備的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。因此,應(yīng)用基因工程技術(shù)在體外高效表達p53蛋白以及對其分離純化方法的建立,一直是近年來抗癌藥物研究領(lǐng)域的熱點之一。
本文首先設(shè)計構(gòu)建了表達p53目標蛋白的基因重組菌。p53C是p53蛋白第94-312位氨基酸之間的序列,涵蓋了p53的整個DNA結(jié)合區(qū)域,p53中超過85%的錯義突變都可以定位到這一核心區(qū)域中。為此,設(shè)計將p53C基因片段插入到pR
2、SET(A)質(zhì)粒載體上,再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到宿主大腸桿菌E.coli BL21(DE3)中,獲得了能夠?qū)δ繕说鞍譸53C進行外源表達的基因重組菌;并進一步對培養(yǎng)條件進行了優(yōu)化,主要考察了誘導時機、誘導時間、誘導劑濃度對基因重組菌表達目標蛋白p53C的影響。實驗結(jié)果表明,誘導時機控制在細菌生長的對數(shù)生長前期,誘導時間8h,誘導劑濃度1mmol/L的最佳培養(yǎng)條件下,可實現(xiàn)目標蛋白p53C的高效表達;最后,采用SP-Sepharose陽離子交換
3、色譜對含有 p53C蛋白的細胞破碎上清液進行分離純化,并對比了不同操作條件對純化效果的影響。結(jié)果表明,采用階躍梯度洗脫,在80%的鹽濃度下,可達到良好的純化效果,目標蛋白的純度提高至21.2%。在pH8.0的色譜操作條件下,目標蛋白收率最高,純度也較高達21.8%。此外初步嘗試了陰離子交換色譜、凝膠色譜和親和色譜,但對目標蛋白p53C的分離效果均不佳,有待于對操作條件和方法的進一步完善和確定。
本研究建立了基因重組菌對p53C
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- p53、c-myc基因蛋白及PCNA在食管癌及癌前病變中的表達及意義.pdf
- p100蛋白及其片段重組質(zhì)粒的構(gòu)建與表達.pdf
- 簡化的兩步法細菌內(nèi)同源重組腺病毒表達載體重組高效制備p53基因
- 重組畢赤酵母菌表達重組人OSF-1蛋白及生物活性測定.pdf
- 基因重組香菇C91-3菌凋亡相關(guān)蛋白Latcripin-2的克隆表達、純化及其抗腫瘤活性研究.pdf
- 重組葡激酶的高效表達與分離純化.pdf
- Y220C突變影響p53C蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的分子機理與抑制劑篩選.pdf
- 28307.重組蛋白ggh在畢赤酵母中高效表達及純化
- 原發(fā)性肝細胞癌中P53基因突變與P53蛋白、MDM2蛋白表達的研究.pdf
- 重組人心肌肌紅蛋白基因工程菌的構(gòu)建及重組蛋白的初步純化.pdf
- 基因重組大腸桿菌高密度發(fā)酵生產(chǎn)類人膠原蛋白及其分離純化.pdf
- 基因重組PCT蛋白在大腸桿菌中的克隆表達和純化.pdf
- 條斑紫菜TPS基因的原核表達及重組蛋白的純化.pdf
- 抑癌基因產(chǎn)物p53在熱休克蛋白基因表達調(diào)控中的作用.pdf
- 重組豬乳鐵蛋白N端的高效表達及抑菌活性檢測.pdf
- FATS調(diào)控p53蛋白表達的分子機制.pdf
- 小鼠重組sTNF-a的構(gòu)建、表達及其蛋白純化.pdf
- 重組Pin1蛋白的表達,純化及其結(jié)晶.pdf
- 血清P53抗體、p53基因表達與原發(fā)性肝癌的分化程度.pdf
- DNase B基因亞克隆、定點突變及目的蛋白的高效表達和純化.pdf
評論
0/150
提交評論