槲皮素對(duì)OX-LDL誘導(dǎo)人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究OX-LDL對(duì)人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響，探討槲皮素干預(yù)OX-LDL誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞遷移、浸潤(rùn)的機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)研究分三部分:實(shí)驗(yàn)一:不同濃度槲皮素第一細(xì)胞活性的影響。1、將不同濃度槲皮素(5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)加入人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)皿中干預(yù)24h，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。實(shí)驗(yàn)二:OX-LDL誘導(dǎo)MMP-2

2、和MMP-9分泌的時(shí)間、劑量依賴性。2.1、不同濃度的OX-LDL(10μg/ml、20μg/ml50μg/ml)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞24h，采用ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度。2.2、將同一濃度的OX-LDL(20μg/ml)作用于人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞不同時(shí)間(6h、12h、24h)，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度。實(shí)驗(yàn)三:觀察槲皮素對(duì)OX-LDL誘導(dǎo)人臍靜脈平滑肌細(xì)胞分

3、泌MMP-2和MMP-9的抑制作用。在上述實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，分為正常對(duì)照組，OX-LDL(20μg/ml)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組。通過ELISA和PCR檢測(cè)細(xì)胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度和其mRNA表達(dá)情況并用明膠酶譜法分析MMP-2和MMP-9的活性。
　　結(jié)

4、果:1.MTT結(jié)果顯示隨著槲皮素濃度(5μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、50μmol/l、100μmol/l)增加，各組細(xì)胞存活率無明顯差異，說明0-100μmol/l濃度的槲皮素對(duì)人臍靜脈平滑肌細(xì)胞的活性無明顯影響。2.細(xì)胞培養(yǎng)上清液檢測(cè)結(jié)果顯示，隨著OX-LDL(10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml)濃度增加，MMP-9的濃度逐漸增加，MMP-2的濃度在20μg/mlOX-LDL時(shí)達(dá)最高濃度。3、同時(shí)隨著

5、OX-LDL作用時(shí)間(6h、12h、24h)的延長(zhǎng)，細(xì)胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度逐漸增加。4、細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)，與正常對(duì)照組相比，其余各組細(xì)胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度明顯增加（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組，細(xì)胞上清中MMP-2和MMP-9的濃度明顯減少（P＜0.05）

6、。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組比較，細(xì)胞上清液中MMP-2和MMP-9的濃度差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4.PCR結(jié)果顯示:與正常對(duì)照組比較，其余各組MMP-2和MMP-9mRNA表達(dá)增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮

7、素(100μmol/l)組MMP-2和MMP-9mRNA表達(dá)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)(P＜0.05)。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(10μmol/l)組比較MMP-2和MMP-9mRNA表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）5.明膠酶譜結(jié)果顯示:細(xì)胞培養(yǎng)24小時(shí)，與正常對(duì)照組相比，其余各組MMP-2和MMP-9的酶活性增加（P＜0.05）。與OX-LDL(20μg/ml)組比較，OX-LDL(2

8、0μg/ml)+槲皮素(50μmol/l)組和OX-LDL(20μg/ml)+槲皮素(100μmol/l)組，MMP-2和MMP-9的酶活性降低(P＜0.05)。OX-LDL(20μg/ml)組與OX-LDL(20μg/ml）+槲皮素(10μmol/l)組比較MMP-2和MMP-9的酶活性差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論:1.OX-LDL可誘導(dǎo)人臍靜脈血管平滑肌細(xì)胞分泌MMP-2/MMP-9增加，并呈時(shí)間劑量依賴性