人脂肪間充質(zhì)干細胞來源的造血干細胞向CIK細胞的誘導(dǎo)分化研究.pdf

1、目的:
　　(1)改良體外分離培養(yǎng)人脂肪間充質(zhì)干細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞的方法,比較兩種來源間充質(zhì)干細胞的成長特性;
　　(2)探索多種細胞因子聯(lián)合誘導(dǎo)下,脂肪間充質(zhì)干細胞來源的造血干細胞(ADMSC-HSCs)能否分化為同時表達CD3+CD56+的淋巴系免疫細胞,即CIK細胞。
　　方法:
　　(1)采用改良酶消化法分離提取人脂肪和臍帶標本中的間充質(zhì)干細胞.通過貼壁培養(yǎng)純化細胞,記錄原代間充質(zhì)細胞生長情況;使用倒

2、置顯微鏡和吉姆薩染色觀察原代和傳代后兩種細胞形態(tài)差別;通過MTT法繪制生長曲線比較兩種細胞的增殖速率;使用流式細胞儀檢測兩種來源的間充質(zhì)干細胞的特征表面分子。
　　(2)取第三代脂肪間充質(zhì)干細胞,利用經(jīng)由細胞穿透肽轉(zhuǎn)染 shRNA(shRNA-337)并加入特定成分培養(yǎng)基誘導(dǎo)其定向分化,培養(yǎng)5天后,經(jīng)流式細胞儀檢測誘導(dǎo)細胞的造血干細胞特征性表面分子CD34、CD38、CD45表達情況。并收獲脂肪間充質(zhì)細胞來源的造血干細胞(ADMS

3、C-HSCs)加入CIK誘導(dǎo)體系繼續(xù)培養(yǎng),培養(yǎng)7天、14天分別后檢測CIK細胞表面標志分子CD3、CD56表達情況。
　　結(jié)果:
　　(1)經(jīng)改良酶消化法均能成功獲得的人脂肪間充質(zhì)干細胞和臍帶間充質(zhì)干細胞,脂肪充質(zhì)干細胞的原代細胞增殖速度較快。兩種間充質(zhì)干細胞均呈典型的短梭形、漩渦樣貼壁生長,臍帶間充質(zhì)干細胞體積較大。通過分析生長曲線,臍帶間充質(zhì)細胞的倍增速度略快于脂肪間充質(zhì)干細胞。兩種間充質(zhì)干細胞均表達CD29、CD44、

4、CD90、CD166間充干細胞特征表面分子,不表達CD34、CD45、CD49f、CD133。
　　(2)脂肪間充質(zhì)干細胞經(jīng)細胞穿透肽轉(zhuǎn)染shRNA-337后,誘導(dǎo)培養(yǎng)5天,細胞形態(tài)和分子表型均發(fā)生改變,ADMSC-HSCs呈集落樣懸浮生長,產(chǎn)生CD34, CD38,CD45造血干細胞表面標志物;收獲后的ADMSC-HSCs經(jīng)CIK細胞誘導(dǎo)培養(yǎng)體系培養(yǎng)后14天出現(xiàn)CD3,CD56高陽性表達,CIK效應(yīng)細胞CD3+CD56+細胞比率