HsA-miR-27b調(diào)控人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞Engrailed-2基因表達(dá)的初步研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q5蘭3密級公玨HsamiR一27b調(diào)控入神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞Engrailed2基因表達(dá)的初步研究APreliminaryStudyofGeneExpressionofEngrailed2inHumanGliomaU251CellRegulatedbyHsamiR27b作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：副指導(dǎo)教師：楊明生物學(xué)微生物學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院陳利玉教授論文答辯日期絲!羔蘭：蘭r答辯委員會主

2、席中南大學(xué)二零一四年五月＼一／渺／HsamiR27b調(diào)控人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞Engrailed一2基因表達(dá)的初步研究摘要目的：前期研究顯示HCMV感染U251細(xì)胞后上調(diào)細(xì)胞hsamiR27b表達(dá)，通過生物信息學(xué)分析顯示Egrailed一2(EN2)基因為hsamiR27b調(diào)控的靶基因之一。本研究的目的是通過實驗證實hsamiR27b靶向調(diào)控EN2，為進(jìn)一步闡明miRNA表達(dá)改變在HCMV感染導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育畸形中的作用提供實驗基礎(chǔ)。

3、方法：①采用生物信息學(xué)方法分析hsamiR27b靶向調(diào)控EN2的靶點位置和EN2的生物學(xué)功能。②構(gòu)建hsa—miR27b表達(dá)載體LV3HmiR27b，將LV3一HmiR27b表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后24h和48h，用Real—timeRTPCR檢測其成熟體HmiR27b的表達(dá)水平。③構(gòu)建EN2一mRNA一3’UTR正義鏈和反義鏈表達(dá)載體PsiEN2一UTRS和PsiEN2一UTRAS。將LV3一HmiR27b和Psi—EN

4、2UTRS／AS共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后48h檢測雙熒光素酶活性值，驗證靶點的正確性。④通過嘌呤霉素篩選LV3HmiR一27b質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的U251細(xì)胞，Westemblot技術(shù)檢測EN2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：@MicroRNA靶點預(yù)測數(shù)據(jù)庫包括Targetscan、miRanda、PicTar和DIANA。microT均能預(yù)測到hsamiR27b與EN2mRNA3’UTR有互補結(jié)合區(qū)，包含3個靶點。miRo數(shù)據(jù)庫聯(lián)合靶點數(shù)據(jù)庫分