細(xì)胞周期素A和P21在白血病細(xì)胞增殖、分化、凋亡中作用的研究.pdf

1、論文第一部份收集了急性白血病患者、門診接受骨髓穿刺患者、健康獻血者這三種不同來源標(biāo)本的外周血或骨髓細(xì)胞,以及白血病細(xì)胞株（HL60）,對四種不同標(biāo)本的S期細(xì)胞比例（簡稱SPF）,cyclinA定量分析后,發(fā)現(xiàn)兩組來自白血病細(xì)胞標(biāo)本S期細(xì)胞cyclinA（即急性白血病患者外周血或骨髓幼稚細(xì)胞為54.9±27.6﹪和白血病細(xì)胞株為94.9±3.7﹪）的表達陽性率要遠遠高于另兩組（門診骨髓穿刺患者骨髓細(xì)胞為3.0±2.7﹪和健康獻血員外周血細(xì)

2、胞為2.0±1.5﹪）,說明正常的S期細(xì)胞,包括成熟細(xì)胞和在骨髓中一些較原始的前體細(xì)胞,其S期的cyclinA表達陽性率是低水平的,只有白血病細(xì)胞或白血病細(xì)胞株S期的cyclinA才異常高表達,提示cyclinA異常高表達在血液系統(tǒng)惡性腫瘤白血病的發(fā)生、發(fā)展中可能起著重要的作用.在論文第二部份,HMBA抗腫瘤細(xì)胞株增殖實驗中發(fā)現(xiàn)隨藥物劑量的加大,細(xì)胞存活率減小,活細(xì)胞率減少（如在U937細(xì)胞中分別為0.5mM,1mM,2mM,4mM H

3、MBA,干預(yù)后第六天細(xì)胞存活率分別為83.7﹪,70.4﹪,61.2﹪,25.5﹪,活細(xì)胞率分別為95.7﹪,92.6﹪,84.2﹪,71.4﹪）.同時,胞內(nèi)cyclinA蛋白表達水平被明顯下調(diào)了,伴隨著cyclinA的下調(diào),細(xì)胞周期被阻滯于G0/G1期的程度也不斷加深（如在U937細(xì)胞中分別為0.5mM,1mM,2mM,4mM HMBA干預(yù)后第三天,S期cyclinA陽性率分別為94.1﹪,88.5﹪,78.1﹪,38.1﹪,S期細(xì)胞

4、比例分別為41.2﹪,40.5﹪,37.5﹪,26.7﹪）.兩者均呈劑量依賴性.這不僅說明cyclinA表達下調(diào)與HMBA抑制白血病細(xì)胞增殖密切相關(guān),結(jié)合論文第一部份發(fā)現(xiàn)的cyclinA異常高表達參與白血病細(xì)胞惡性增殖,提示cyclinA的高表達可能是血液系統(tǒng)惡性腫瘤-白血病無限增殖的發(fā)病機理之一.在論文的第三部份,HMBA誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化及凋亡的實驗中,我們發(fā)現(xiàn)HMBA誘導(dǎo)U937和HL60細(xì)胞的分化程度呈劑量依賴性（如在U937細(xì)

5、胞中分別為0.5mM,1mM,2mM,4mM HMBA干預(yù)后第三天,CD11b陽性的分化細(xì)胞比率分別為57.6﹪,68.2﹪,86.0﹪,92.0﹪）.并在高劑量（4mM）HMBA作用下,U937和HL60細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡（如在U937細(xì)胞,Annexin V+并且PI-細(xì)胞達到15.4﹪）.說明當(dāng)白血病細(xì)胞株的增殖受到抑制的同時分化程度會有所增加,劑量達到一定閾值后即出現(xiàn)了凋亡.該研究中所用的流式細(xì)胞儀胞漿內(nèi)間接免疫熒光/DNA雙染色法