HPS血清型4、13型TbpA對豚鼠的交互免疫保護性研究.pdf

1、副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis，HPS）在特定條件下可致豬，特別是斷奶仔豬和保育豬發(fā)生以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、腦膜炎為主要特征的副豬嗜血桿菌病，藥物防治、疫苗接種等是常用的防治該病的方法。然而，各類抗生素不合理的長期使用致使HPS的耐藥性日益增強;同時由于HPS血清型復(fù)雜，相互間缺乏交互免疫性，且具有明顯的地方特征，目前僅有的一些商品化滅活疫苗很少或不能產(chǎn)生交叉保護。因此研制具有良好免疫性，尤其是能誘導(dǎo)產(chǎn)生交互免

2、疫保護力的新型疫苗具有重要的現(xiàn)實意義。
　　本實驗室前期的研究結(jié)果顯示，HPS血清型13型轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白A(TbpA)不僅對于相同血清型菌株攻毒的豚鼠具有良好的免疫活性，還可以對不同血清型菌株（血清型4型）提供一定的交叉保護力，但其他血清型HPS的TbpA能否針對不同血清型提供交互免疫保護尚不明確。本研究系在前期研究的基礎(chǔ)上，利用表達的HPS血清型4、13型重組TbpA免疫豚鼠，通過檢測免疫后豚鼠血清中抗體水平和細胞因子（腫瘤壞死因

3、子TNF-α，干擾素IFN-γ，白細胞介素IL-2、IL-5、IL-8，趨化因子MCP-1）水平，觀察攻毒后豚鼠的采食量、精神狀態(tài)及死亡率，剖檢病變及其病理組織學(xué)變化，探究HPS不同血清型的TbpA對豚鼠的交互免疫保護作用，從而為后期在本動物（仔豬）上進一步開展相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。
　　首先，Reed-Muench（累積法）測定HPS血清型4、13型對HPS抗體陰性豚鼠的半數(shù)致死量(LD50)。其次，篩選54只健康的40日齡HPS抗

4、體陰性雌性豚鼠，每組隨機分配6只，共9組;A1、A2組以100μg/只免疫HPS血清型4型TbpA;B1、B2組以100μg/只免疫HPS血清型13型TbpA;C1、C2組以200μL/只注射PBS作為攻毒對照組;A3、B3、C3組以200μL/只注射PBS作為空白對照。采用弗氏佐劑，背部皮下多點注射，免疫兩次，每次免疫劑量相同，間隔時間20天。每次免疫后10天心臟采血分離血清，檢測血清中抗體和細胞因子(IL-2、IL-5、IL-8、I

5、FN-γ、TNF-α、MCP-1)含量。在第2次免疫后21天，A1、B1、C1以HPS血清型4型1×LD100劑量進行攻毒，A2、B2、C2以HPS血清型13型1×LD100劑量進行攻毒，A1、B1、C1注射等量PBS，統(tǒng)計免疫保護率，剖檢豚鼠，制作病理組織切片觀察比較病理變化。
　　結(jié)果顯示，豚鼠在免疫HPS血清型4、13型TbpA后，血清中抗體水平均有所升高，二免后均上升顯著，但兩者之間差異不顯著;除MCP-1外，5種細胞因子

6、水平在兩次免疫后均顯著上升，且兩次免疫之間差異顯著，但免疫血清型4和13型TbpA組之間差異不顯著;血清型4型TbpA免疫組對同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護率為66.7％和50％;血清型13型TbpA免疫組對同血清型和不同血清型HPS的攻毒保護率為81.3％和50％;免疫攻毒組存活豚鼠和空白對照組豚鼠均未見明顯肉眼病變和病理組織變化，而死亡豚鼠肺臟出血、壞死，肝臟表面纖維素性滲出，胸腔、腹腔積液，胸腔粘連，腦出血，肺臟、脾臟、肝臟