采用自體肌衛(wèi)星細(xì)胞及異種膀胱無細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程膀胱的實驗研究.pdf

1、第一部分：種子細(xì)胞—肌衛(wèi)星細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定 [目的]本部分通過應(yīng)用改良Percoll非連續(xù)密度梯度離心法分離純化培養(yǎng)新西蘭兔骨骼肌干細(xì)胞—肌衛(wèi)星細(xì)胞，探討為組織工程膀胱的構(gòu)建提供種子細(xì)胞的可行性。 [方法]分別采用差速貼壁法和Percoll非連續(xù)密度梯度離心法進(jìn)行新西蘭兔肌衛(wèi)星細(xì)胞的原代培養(yǎng)并進(jìn)行純化。光鏡及掃描電鏡檢查細(xì)胞形態(tài)。通過免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法鑒定培養(yǎng)細(xì)胞純度。利用MTT法測定細(xì)胞生長曲線，同時測定細(xì)胞分裂

2、指數(shù)，了解細(xì)胞生長特性。 [結(jié)論]應(yīng)用Percoll非連續(xù)密度梯度離心法可以培養(yǎng)得到高純度的肌衛(wèi)星細(xì)胞，該方法所培養(yǎng)的細(xì)胞體外傳代周期短、具有較強(qiáng)增殖能力，短期即可獲得足夠數(shù)量的細(xì)胞，可作為組織工程用種子細(xì)胞培養(yǎng)方法。 第二部分：膀胱無細(xì)胞基質(zhì)支架材料的制備和特性分析 [目的]探討豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)制備的方法及其作為生物支架材料應(yīng)用于組織工程膀胱構(gòu)建的可行性。 [方法]新鮮豬膀胱分別采用酶消化法和

3、去污劑洗滌法進(jìn)行脫細(xì)胞處理。處理后的材料進(jìn)行HE染色及電鏡檢查有無細(xì)胞成分殘留。以新西蘭兔肌肉干細(xì)胞為鑒定細(xì)胞接種于96孔板中，分別采用豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)浸提液及完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，應(yīng)用MTT法進(jìn)行細(xì)胞毒性測定。 [結(jié)論]采用化學(xué)方法可以充分對豬膀胱進(jìn)行脫細(xì)胞處理獲得膀胱無細(xì)胞基質(zhì)。所獲支架材料具有一定的彈性、韌性及多微孔結(jié)構(gòu)，為種子細(xì)胞的貼附和物質(zhì)代謝提供了較好的物質(zhì)基礎(chǔ)。同時該支架材料細(xì)胞毒性低、具有良好的組織相容性，是理想的

4、膀胱組織工程用生物支架材料。 第三部分組織工程膀胱的體外構(gòu)建及動物膀胱替代實驗 [目的]通過采用自體肌衛(wèi)星細(xì)胞(MDSCs)和豬膀胱無細(xì)胞基質(zhì)(PBAM)構(gòu)建組織工程膀胱的實驗研究，探討應(yīng)用組織工程膀胱進(jìn)行膀胱替代修復(fù)的可行性。 [方法]以新西蘭兔自體MDSCs為種子細(xì)胞，以異種PBAM為支架材料，采用二次沉淀法將MDSCs靜態(tài)接種于PBAM表面，進(jìn)行短暫體外培養(yǎng)，獲得組織工程膀胱。兔分三組行大部分膀胱