蘋果類鈣調(diào)磷酸酶B亞基蛋白MdCBL3基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、植物在生長過程中經(jīng)常會(huì)遇到高鹽、干旱、水澇和低溫等非生物逆境脅迫。植物感知到非生物脅迫后會(huì)產(chǎn)生一些防御機(jī)制從而避免傷害發(fā)生。植物 CBL基因在植物響應(yīng)逆境脅迫過程中發(fā)揮十分重要的作用。擬南芥中對(duì) CBL研究較多，CBL能夠響應(yīng)多種脅迫，尤其是鹽脅迫，但在果樹等木本植物中研究較少。本研究從‘嘎拉’蘋果（Malus× domestica Borkh.‘Gala’）中克隆了一個(gè)CBL基因MdCBL3（序列號(hào)：MDP0000155124），并對(duì)

2、其進(jìn)行生物信息學(xué)分析，利用定量 PCR技術(shù)檢測(cè)其在不同組織和逆境條件下的表達(dá)水平。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得轉(zhuǎn)基因蘋果愈傷組織、擬南芥，并對(duì)轉(zhuǎn)基因愈傷、擬南芥進(jìn)行功能鑒定。旨在為進(jìn)一步深入研究蘋果 CBL的功能奠定基礎(chǔ)。具體研究工作和結(jié)果如下：
　　1.克隆了蘋果MdCBL3基因，其由852 bp堿基組成，編碼284個(gè)氨基酸殘基的多肽鏈?；蚪M結(jié)構(gòu)分析表明MdCBL3基因位于1號(hào)染色體上，含有8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。
　　2.熒光

3、定量PCR分析表明MdCBL3基因在蘋果‘嘎拉’中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)MdCBL3基因在所有組織中都有表達(dá)，在根中表達(dá)量最高。
　　3.蛋白同源比對(duì)分析顯示， MdCBL3含有3個(gè)保守的 EF手形結(jié)構(gòu)域 EF-hand calcium binding motif，與擬南芥 AtCBL3蛋白序列類似，表明蘋果CBL3與擬南芥CBL3具有較高的同源性。
　　4.利用Plant Care數(shù)據(jù)庫對(duì)MdCBL3進(jìn)行啟動(dòng)子順式作用元件的預(yù)測(cè)

4、分析，MdCBL3啟動(dòng)子序列中存在低溫、干旱、光、生長素、赤霉素、水楊酸、防御等響應(yīng)元件。表明MdCBL3可能受低溫、干旱、光、激素等多種環(huán)境的調(diào)控，通過參與復(fù)雜的的生物學(xué)過程來調(diào)控其特定的生長發(fā)育過程。
　　5.熒光定量PCR分析MdCBL3基因在不同脅迫的響應(yīng)，發(fā)現(xiàn)MdCBL3基因?qū)}、干旱、低溫有一定的響應(yīng)。
　　6.構(gòu)建MdCBL3表達(dá)載體并利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法侵染蘋果愈傷組織、野生型擬南芥。半定量和定量RT-PCR證明